[发明专利]一株分泌抗2型猪链球菌表面蛋白Lmb单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其制备方法在审
| 申请号： | 201710187180.2 | 申请日： | 2017-03-27 |
| 公开（公告）号： | CN108660114A | 公开（公告）日： | 2018-10-16 |
| 发明（设计）人： | 潘秀珍;高基民;孙卫平;王长军;李先富 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军南京军区军事医学研究所 |
| 主分类号： | C12N5/20 | 分类号： | C12N5/20;C07K16/12;C12R1/91 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 夏平 |
| 地址： | 210002 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 表面蛋白 猪链球菌 分泌 杂交瘤细胞株 单克隆抗体 制备 病原微生物 单克隆抗体细胞株 雌性Balb/c小鼠 免疫学检测技术 鼠源单克隆抗体 小鼠骨髓瘤细胞 分离脾脏 抗体效价 体内抗体 免疫原 鼠源 小鼠 筛选 融合 | ||
1.一株分泌抗2型猪链球菌表面蛋白Lmb的单克隆抗体的杂交瘤细胞株2F1，其特征在于该杂交瘤细胞株通过如下方法制备：
(1)采用纯化的2型猪链球菌05ZYH33的表面蛋白Lmb四次免疫雌性Balb/c小鼠，使小鼠体内抗体达到最高峰时分离脾脏B淋巴细胞；
(2)将步骤(1)分离的脾脏B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合；
(3)以纯化后的重组Lmb蛋白为抗原包被ELISA板，使用间接ELISA法筛选阳性克隆；再进一步以重组Sao蛋白为抗原,釆用Western blot法再次验证筛选得到的阳性克隆；最后通过染色体计数证明筛选得到的阳性克隆，最终获得杂交瘤细胞株2F1。
2.根据权利要求1所述的分泌抗2型猪链球菌表面蛋白Lmb单克隆抗体的杂交瘤细胞株2F1，其特征在于：步骤(1)中选用雌性6周Balb/c小鼠，采用完全弗氏佐剂乳化的重组Lmb蛋白为免疫原，注射蛋白量为100μg/只鼠；间隔2周追加免疫共3次，并改为不完全弗氏佐剂乳化，注射蛋白量保持不变；在融合前3天加强免疫一次，注射蛋白量为100μg/只鼠。
3.一种制备分泌抗2型猪链球菌表面蛋白Lmb单克隆抗体的杂交瘤细胞株的方法，其特征在于包含如下步骤：
(1)采用弗氏佐剂等体积乳化2型猪链球菌表面蛋白Lmb四次免疫雌性Balb/c小鼠，使小鼠体内抗体达到最高峰时分离脾脏B淋巴细胞；
(2)将步骤(1)分离的脾脏B淋巴细胞和小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合；
(3)以纯化后的重组Lmb蛋白为抗原包被ELISA板，以重组Lmb蛋白为包被抗原采用间接ELISA法筛选阳性克隆；进一步以重组蛋白Lmb为抗原用Western blot法再次验证ELISA筛选得到的阳性克隆；最后通过染色体计数证明筛选得到的阳性克隆，最终获得分泌抗2型猪链球菌表面蛋白Lmb的杂交瘤细胞株2F1。
4.根据权利要求3所述的制备分泌抗2型猪链球菌表面蛋白Lmb的单克隆抗体的杂交瘤细胞株的方法，其特征在于：步骤(1)中选用6周雌性Balb/c小鼠，采用完全弗氏佐剂乳化的重组Lmb蛋白为免疫原，注射蛋白量为100μg/只鼠；间隔2周追加免疫共3次，并改为不完全弗氏佐剂乳化，注射蛋白量保持不变；在融合前3天加强免疫一次，注射蛋白量为100μg/只鼠。
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