[发明专利]用于检测微小脲原体血清型3的引物对及其试剂盒

说明书

本发明提供一种用于检测微小脲原体血清型3的引物对及其试剂盒。其中所述引物对的DNA序列如SEQ ID NO:1及SEQ ID NO:2所示。本发明的引物对可用于UP‑3泌尿生殖系统感染的快速检验，以及感染引发的相关病症的风险评估。还提供一种用于UP‑3的PCR检测的试剂盒，其包含本发明的引物对。

技术领域

本发明涉及微小脲原体血清型3的核酸检测方法，特别是用于检测微小脲原体血清型3的引物对及其试剂盒。

背景技术

尿浆菌感染为泌尿生殖系统最常见的细菌感染，感染后常引起泌尿生殖系统相关的疾病如前列腺炎、阴道炎、尿道炎及不孕等，孕妇若感染尿浆菌，自然流产、早产、绒毛膜羊膜炎(chorioamnionitis)等疾病的风险将提高[1]，若进一步经由羊水进入婴儿口、鼻、肺部，恐引起小儿肺支气管发育不全(bronchopulmonary dysplasia，BPD)、呼吸窘迫症候群(respiratory distress syndrome，RDS)或甚至新生儿死亡等[1-3]。

因其潜伏期长且多无症状，据估计，健康成年女性子宫颈或阴道感染尿浆菌的比例约为40至80％[2,4]，孕妇由于妊娠期间荷尔蒙改变，抑制免疫反应，导致更容易受到尿浆菌的感染，而由母亲垂直感染至新生儿的比例更达90％[2]。

尿浆菌(Ureaplasma spp.)分类上属于柔膜菌纲(Mollicutes)、支原体目(Mycoplasmatales)、支原体科(Mycoplasmataceae)、尿浆菌属(Genus ureaplasma)，包括微小脲原体(Ureaplasma parvum)及溶脲脲原体(Ureaplasma urealyticum)[2]，目前依据尿浆菌表面的多带抗原(Multiple banded antigen，MBA)可区分成14种血清型[2,5]，其中4种属于微小脲原体(血清型1、3、6及14)，其他10种属于溶脲脲原体(血清型2、4、5及7-13)[1]。

特定血清型的尿浆菌常被探讨其盛行率、抗药性、致病性、侵入性、早产并发症及特定疾病的关联性等[6-8]，Sung等人研究发现微小脲原体血清型3(UP-3)以及溶脲脲原体血清型10多在具有严重BPD及死亡的婴儿的呼吸道分泌物中发现[4]，而Naessens等人提出溶脲脲原体血清型4常在反复性流产的孕妇上发现[6]，显示尿浆菌血清型的分型与辨别有助于厘清其致病机转及流行病学研究。

尿浆菌检测较常应用于妇女泌尿生殖道感染及新生儿呼吸道感染，检测方法包含传统培养法、聚合酶连锁反应法(PCR)、即时定量聚合酶连锁反应(real-time PCR)等，其中传统培养法耗时、专一性与灵敏度较低。

即时定量聚合酶连锁反应主要利用荧光染剂及聚合酶连锁反应进行即时监测反应产物量，聚合酶连锁反应以DNA聚合酶(例如Taq聚合酶)延长专一性引物所粘合的区域而合成新的双股DNA。而荧光染剂可搭配Taqman探针或SYBR Green I等，使用SYBR Green I具有快速、易操作及灵敏度佳的优势[9]。

目前坊间诊所及医院检验科多以即时定量聚合酶连锁反应法提供相关服务，可利用尿素酶(urease)基因片段为检测目标设计引物，针对微小脲原体及溶脲脲原体的检测极限分别为10⁷及10⁴复制体(copies)/mL。

中国CN102094072 A号专利揭示一种SYBR Green法检测溶脲脲原体感染的PCR试剂盒。中国CN10149726 B号专利则揭示一种快速同步检测沙眼衣原体、微小脲原体和溶脲脲原体的试剂盒。

仍需要能够专一地检测特定血清型的微小脲原体或溶脲脲原体的核酸检测方法。

发明内容