[发明专利]一株松树内生细菌短小芽孢杆菌LYMC-3及其应用

说明书

本发明公开了一株松树内生细菌，分类命名为短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）LYMC‑3，已保藏与中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 2016775，保藏日期：2016年12月21日，保藏地址为中国武汉武汉大学。本发明的松树内生短小芽孢杆菌LYMC‑3，为松树内生细菌，其无菌发酵滤液具有很强的杀线作用，无菌发酵滤液的原液及稀释2倍、4倍、10倍液处理松材线虫24h后，其死亡率达到100%，且死亡的虫体全部消解。经无菌发酵滤液处理过的虫卵均未孵化，且虫卵的卵壳受到了破坏，可见该短小芽孢杆菌LYMC‑3在杀线方面讲具有很好的应用前景，具有很好生防作用。

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株松树内生细菌短小芽孢杆菌LYMC-3及其应用。

背景技术

松树萎蔫病是由松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)寄生在松属树种体内取食营养而导致树木迅速死亡的一种特大毁灭性病害，属国际重要检疫对象(杨宝君等，2003)，列为森林病虫害之首，被称为“无烟的森林火灾”。该线虫主要分布在美国、加拿大、墨西哥、日本、韩国、希腊、中国和葡萄牙等多个国家。我国自1982年在南京发现以来，现已扩散到江苏、浙江、安徽、福建、江西、山东、河南、湖北、湖南、广东、广西、重庆、四川、贵州、陕西、香港和台湾等地，对我国造成林业经济、森林生态上的巨大损失和自然景观的严重破坏，并对广大适生区的松林构成严重威胁。在我国，松材线虫的主要传播媒介是松墨天牛(Monochamus alternatus)。目前生产上对该病的防治主要靠加强检疫和清理林间病死树，辅以对松墨天牛的化学防治和生物防治，而针对病原松材线虫的防治，尤其是松材线虫的生物防治研究的较少。

目前针对松材线虫的生防研究主要集中在杀线植物、真菌和放线菌等几类因子上，而有关细菌用作松材线虫生防因子的报道较少，植物内生细菌对松材线虫的生防研究更是极少。利用内生细菌防治植物病害一直是国内外的研究热点。以前绝大多数植物病害生防菌是从土壤或植物根际土壤微生物中分离筛选得到的。但由于这些土壤微生物易受外界条件的影响，并难于在与土壤、植物根际或叶围习居微生物的竞争中长期占优势，因而极大地影响了其实用价值(李长松，1992)。而植物内生细菌作为生防因子有很多优点：它们分布于植物的不同组织中，有充足的营养物质，同时受到植物组织的保护，不受外部恶劣环境如强烈日光、紫外线风雨等的影响，具有稳定的生态环境(易有金等，2007)。因此，内生细菌相对于其它细菌更易发挥生防作用。利用内生细菌防治植物真菌和细菌病害的研究很多，而在防治线虫病害方面研究的很少。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一株松树内生短小芽孢杆菌，满足使用需求。本发明的另一目的是提供一株松树内生短小芽孢杆菌的应用。

技术方案：为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：

一株松树内生细菌，分类命名为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)LYMC-3，已保藏与中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO：M 2016775，保藏日期：2016年12月21日，保藏地址为中国武汉武汉大学。

所述的短小芽孢杆菌LYMC-3在杀松材线虫中的应用。

所述的短小芽孢杆菌LYMC-3在杀松材线虫卵中的应用。

一种制备所述的短小芽孢杆菌LYMC-3的无菌发酵滤液的方法：将保存于牛肉膏蛋白胨固体培养基上的短小芽孢杆菌LYMC-3接入含牛肉膏蛋白胨液体培养基50mL的三角瓶中，于28℃和无光照条件下以200r/min转速摇培；将摇培4d后的细菌培养液用滤膜孔径为0.22μm的细菌过滤器将菌体过滤后，所得的滤液为无菌发酵滤液。

所述的制备短小芽孢杆菌LYMC-3的无菌发酵滤液的方法所获得的无菌发酵滤液。

所述的无菌发酵滤液在杀松材线虫中的应用。