[发明专利]一套用于柳树优良品种遗传鉴定的专用引物及其应用

权利要求书

1.一套用于柳树不同品种遗传鉴定的专用引物，其特征在于，各专用引物序列如下表所示：

2.根据权利要求1所述的用于柳树不同品种遗传鉴定的专用引物，其特征在于，柳树品种包括25个柳树优良品种，具体为：苏柳485，苏柳52-2，金丝垂柳J1011，金丝垂柳J1010，杞簸柳JW9-6，苏柳J795，苏柳J799，苏柳J172，簸杞柳JW8-26，花叶柳，银芽柳J1037，银芽柳J1050，银芽柳J1052，银芽柳J1055，银芽柳J887，苏柳932，渤海柳1号，渤海柳2号，渤海柳3号，渤海柳4号，盐103号，‘旱沙王’北沙柳，旱柳，沙柳，黄柳。

3.一种应用权利要求1所述的专用引物鉴定柳树品种的方法，其特征在于，以待鉴定柳树样品的DNA和已知品种的柳树DNA为对照模板，选取序列表中任一引物对，进行PCR扩增获得产物，对产物进行毛细管凝胶电泳；对比待检样品和已知品种的指纹图，若基因型不同，则排除待鉴定样品为已知品种；若基因型相同，可选用序列表中的其它引物对检测结果进行确定；根据多个引物的检测结果，查基因型频率表相应品种在相应引物位点上的基因型频率，计算出鉴定结果的准确率；其中，基因型频率如下所示：

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4.根据权利要求3所述的应用权利要求1所述的专用引物鉴定柳树品种的方法，其特征在于，PCR反应体系为：模板DNA 40ng，0.01uL dUTPs，1.5mg BSA，上下游引物各10pmol，0.4uL Taq DNA聚合酶，1.5uL含20mM MgCl2的10×buffer，加灭菌去离子水补充反应体积到15uL。

5.根据权利要求3所述的应用权利要求1所述的专用引物鉴定柳树品种的方法，其特征在于，PCR反应条件为：94℃预变性4min 45s；10个TouchDown循环：94℃变性30s，59℃到50℃退火30s，72℃延伸30s；然后进行25个常规PCR循环：94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s；72℃延伸5min。

6.根据权利要求3所述的应用权利要求1所述的专用引物鉴定柳树品种的方法，其特征在于，所述的柳树品种包括25个柳树优良品种，具体为：苏柳485，苏柳52-2，金丝垂柳J1011，金丝垂柳J1010，杞簸柳JW9-6，苏柳J795，苏柳J799，苏柳J172，簸杞柳JW8-26，花叶柳，银芽柳J1037，银芽柳J1050，银芽柳J1052，银芽柳J1055，银芽柳J887，苏柳932，渤海柳1号，渤海柳2号，渤海柳3号，渤海柳4号，盐103号，‘旱沙王’北沙柳，旱柳，沙柳，黄柳。