[发明专利]一种利用甲烷产聚‑β‑羟基丁酸酯的甲烷氧化菌‑异养菌混合菌群的驯化方法在审
| 申请号： | 201710194019.8 | 申请日： | 2017-03-29 |
| 公开（公告）号： | CN107058206A | 公开（公告）日： | 2017-08-18 |
| 发明（设计）人： | 周集体;张婷婷;王晓伟;张玉 | 申请（专利权）人： | 大连理工大学 |
| 主分类号： | C12N1/36 | 分类号： | C12N1/36 |
| 代理公司： | 大连理工大学专利中心21200 | 代理人： | 温福雪,侯明远 |
| 地址： | 116024 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 甲烷 羟基 丁酸 氧化 异养菌 混合 驯化 方法 | ||
1.一种利用甲烷产聚-β-羟基丁酸酯的甲烷氧化菌-异养菌混合菌群的驯化方法，其特征在于，步骤如下：
步骤1：将富含微生物的活性污泥作为富集驯化甲烷氧化菌-异养菌混合菌群的原料；
步骤2：培养基的配制
(1)配制不含氮元素的矿物盐NFMS培养基，其组成为：0.272g/L的KH2PO4,2.868g/L的Na2HPO4·H2O，0.1g/L的MgSO4·7H2O，0.20g/L的CaCl2·6H2O和1mL/L的微量元素；
(2)配制微量元素溶液：250mg/L的Na-EDTA，500mg/L的FeSO4·7H2O，380mg/L的Fe-EDTA，400mg/L的ZnSO4·7H2O，15mg/L的H3BO3，20mg/L的MnCl2·4H2O，260mg/L的Na2MoO4·2H2O，10mg/L的NiCl2·6H2O，50mg/L的CoCl2·6H2O；
(3)配制CuSO4·5H2O储备液；
(4)向NFMS培养基加入CuSO4·5H2O储备液，使CuSO4的摩尔浓度为5-10μmol/L，以提高混合菌群的MMO活性；
步骤3：甲烷氧化菌-异养菌混合菌群的富集驯化
(1)向体系中加入活性污泥和步骤2(4)得到的NFMS培养基，使体系顶空和液相的体积比为2:1-5:1，将体系密封；
(2)更换顶空气体，使顶空气体的组成为10-20％的氧气、25％的甲烷气和55-65％的氮气；以甲烷气为唯一碳源，以氮气作为驯化过程唯一氮源，进行甲烷氧化菌-异养菌混合菌群的富集驯化；为保证充足的气体底物，每24-72小时更换一次顶空气体；
(3)每6-10天按4-10％的体积比例将富集到的菌液接种到新的步骤2(4)得到的NFMS培养基中，以保证充足的营养物质；
步骤4：PHB合成过程
(1)在每次循环结束时，收集菌体进行PHB合成；
(2)向体系中加入收集的菌体和新的步骤2(4)得到的NFMS培养，使体系顶空和液相的体积比为5:1-11:1，将体系密封；
(3)更换顶空气体，使顶空气体的组成为50-75％甲烷和25-50％氧气，在没有氮源的条件下进行PHB合成；为保证充足的气体底物，每24-48小时更换一次顶空气体，72小时后，PHB的合成过程完成；
步骤5：经过220-320天后的培养后，甲烷氧化菌-异养菌混合菌群的驯化完成。
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