[发明专利]一种测定玉兰亚属植物中植物激素的方法

权利要求书

1.一种测定玉兰亚属植物中植物激素的方法，所述植物激素为GA3、IAA和ABA；其特征在于，包括植物激素的提取步骤、标准溶液制备步骤、高效液相色谱分析步骤和标准溶液测定步骤；

所述植物激素的提取步骤如下：

A)采用液氮预冷的研钵低温研磨植物组织样品至粉末，随后加入4℃预冷的甲醇溶液，继续研磨成匀浆；

B)将所述匀浆转入第一离心管中，第一低温避光浸提，1～4℃避光浸提15～21h；

C)第一离心，1～4℃、10000～14000r/min离心8～12min，吸取第一上清液，在沉淀中加入低温甲醇溶液，第二低温避光浸提1～4℃避光浸提1～3h；

D)第二离心，1～4℃、10000～14000r/min离心8～12min，吸取第二上清液，合并第一上清液和第二上清液至第一鸡心瓶；

E)向第一鸡心瓶中滴入氨水，35℃～40℃减压旋转蒸发至水相；

F)将前述水相完全转移至第二离心管，向第二离心管中加入PVPP，常温摇床振荡15～25min后第三离心，10000～14000r/min离心8～12min；吸取第三上清液，并用HCl溶液调节pH至2.5～3.0，随后加入等体积乙酸乙酯萃取，重复操作本步骤1～3次；

G)合并萃取液至第二鸡心瓶，35℃～40℃减压浓缩至干；

H)用初始流动相溶解后过微孔滤膜，得到样品待测液，低温保存，所述初始流动相为20％甲醇，80％0.1M乙酸水溶液；

所述高效液相色谱分析步骤中：

色谱条件为：

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18；流动相A：甲醇，流动相B：0.1M乙酸水溶液；进样量：10μL；柱温：35℃；检测波长：254nm；

用外标法进行定量测定；

所述高效液相色谱分析步骤中，采用梯度洗脱，洗脱条件：0～5min，20％～20％A；5～10min，20％～30％A；10～20min，30％～30％A；20～23min，30％～40％A；23～40min，40％～40％A；40～45min，40％～20％A；流速：1mL/min。

2.根据权利要求1所述的测定玉兰亚属植物中植物激素的方法，其特征在于，所述玉兰亚属植物为红花玉兰或白玉兰；所述植物组织为红花玉兰花芽、花被片或叶片，或白玉兰的花被片或叶片。

3.根据权利要求1所述的测定玉兰亚属植物中植物激素的方法，其特征在于，所述标准溶液制备步骤具体是，准确称取GA3标准品0.0057g、IAA标准品0.0052g、ABA标准品0.0042g，分别用甲醇定容至10mL，配制成浓度分别为570mg/L、520mg/L、420mg/L的标准贮备液，密封后于-20℃低温避光保存；用移液器吸取一定量各激素的标准贮备液，稀释成相当于原浓度1/4、1/8、1/16、1/32、1/64、1/128、1/256、1/512、1/1024、1/2048的混合标准溶液，低温避光保存备用。

4.根据权利要求3所述的测定玉兰亚属植物中植物激素的方法，其特征在于，所述标准溶液测定步骤具体是，将GA3、IAA、ABA的标准贮备液分别在确定的色谱条件下进样，记录每种激素的保留时间，从而定性；再将混合标准溶液在确定的色谱条件下重复进样3次，记录保留时间和峰面积，计算相对标准偏差；以各进样浓度为横坐标x，峰面积为纵坐标y，绘制标准工作曲线，计算回归方程及相关系数，从而定量。

5.根据权利要求1所述的测定玉兰亚属植物中植物激素的方法，其特征在于，所述甲醇溶液为体积分数为80％的甲醇溶液。

6.据权利要求1所述的测定玉兰亚属植物中植物激素的方法，其特征在于，所述低温甲醇溶液是4℃预冷的体积分数为80％的甲醇溶液。

7.根据权利要求1所述的测定玉兰亚属植物中植物激素的方法，其特征在于，所述第一低温避光浸提4℃避光浸提15～21h。

8.根据权利要求1所述的测定玉兰亚属植物中植物激素的方法，其特征在于，所述第二低温避光浸提为4℃避光浸提2h。