[发明专利]一种ASE‑HPLC法测定人参中人参皂苷Rg1和Re含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于化学检测领域，尤其是一种ASE-HPLC法测定人参中人参皂苷Rg1和Re含量的方法。

背景技术

人参是我国地道药材中应用最广泛的代表，人参皂苷是人参的主要药效成分，人参皂苷具有增强记忆力，提高免疫力，改善心血管，调节内分泌，延缓衰老和抗肿瘤等功能，人参皂苷的含量测定已经成为国内外研究的热点。

但是在测定过程中，由于样品中的色素杂质过多，从而造成测定结果不准确，因此建立有效除杂并测定准确的人参皂苷检测方法对人参及其制剂的质量控制具有重要意义。

发明内容

针对上述不足，本发明旨在将ASE(快速溶剂萃取法)、GCB(石墨化炭黑)和HPLC(高效液相色谱法)三者有效结合，从而提高测定的准确率以及稳定性，提高方法的重复性的一种ASE-HPLC法测定人参中人参皂苷含量的方法，且该方法可同时测定人参中的人参皂苷Rg1和Re。

为了解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC法测定人参叶中人参皂苷Rg1和Re含量的方法，依次包括下述步骤：

步骤1：采用ASE对粉碎后的人参进行甲醇萃取，取1ml萃取液与75mg石墨化炭黑混合，过滤，得甲醇萃取液；

步骤2：采用HPLC法检测甲醇萃取液中人参皂苷Rg1和Re的含量。

进一步的，所述的步骤1包括下述子步骤：

步骤S1：将样品粉碎，过三号筛，取过筛后的粉末0.2g；

步骤S2：将0.2g的人参粉末与1g硅藻土混合，装于放有过滤膜的5ml ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；

步骤S3：用甲醇萃取，蒸干，加甲醇溶解，并用甲醇定容至10ml；

步骤S4：取1ml步骤S3所得溶液与75mgGCB混合，漩涡振荡1min，离心，取上清液过0.22微米滤膜后得甲醇萃取液。

进一步的，步骤S3所述的萃取，参数如下：萃取温度为110℃，萃取时间为7min，萃取次数为3次，冲洗体积为80％，吹扫时间为60s。

进一步的，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为Thermo Syncronis Dim.AQ，1.7μm，50×2.1mm；柱温为40℃；流速为0.3mL/min；流动相为体积比等于18:82的乙腈-水；检测波长：203nm。

进一步的，步骤S4所述的离心参数为：速度为10000r/min，时间为4min。

进一步的，步骤1所述的萃取所采用的仪器为美国DIONEX公司的ASE350快速溶剂萃取仪；步骤2所述的HPLC法检测所采用的仪器为Agilent 1290高效液相色谱仪。

本发明与传统方法相比，具有以下优点：

1.本发明曾对快速溶剂萃取使用的溶剂进行考察，使用过正己烷饱和的甲醇和甲醇两种溶剂进行提取，结果显示甲醇提取和药典方法的含量一致且杂质峰基本相同，正己烷饱和的甲醇提取的样品含量偏低，故采用与药典一致的提取溶剂；

2.本发明曾对提取并定容后的样品进行净化，分别取定容后的样品1.00mL分别加入到装有25mg、50mg、75mg、100mg的GCB的2ml离心管涡旋1min，10000r/min离心4min后吸取上清液过滤上机测定。结果表明GCB能优先吸附色素使样品中的杂质明显降低，但当色素被吸附完全后样品中待测成分就有可能GCB吸附，故选择75mg的GCB添加量。

3.本发明将ASE(快速溶剂萃取法)、GCB(石墨化炭黑)和HPLC(高效液相色谱法)三者有效结合，从而提高测定的准确率以及稳定性，提高方法的重复性的方法，且该方法可同时测定人参中的人参皂苷Rg1和Re。

附图说明

图1为人参皂苷Rg1以浓度(mg)-峰面积进行线性回归图；

图2为人参皂苷Re以浓度(mg)-峰面积进行线性回归图；

图3为人参皂苷Rg1和Re对照品图谱图；

图4为ASE法萃取的样品图谱图；

图5为药典方法提取的样品图谱；

图6为使用不同量的GCB对样品杂质的影响图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。

实施例1

1.仪器设备及试剂

1.1仪器：