[发明专利]一种ASE‑HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法

说明书

技术领域

本发明属于化学检测领域，尤其是一种ASE-HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法。

背景技术

《中国药典》2015年版一部制备供试品方法为：取本品约3g，剪成碎片，揉成絮状，取约2g，精密称定，置索氏提取器中，加入三氯甲烷适量，加热回流6小时，弃去三氯甲烷液，药渣挥去三氯甲烷，再置索氏提取器中，加入甲醇适量，加热回流6小时提取液回收甲醇至适量，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。该方法萃取时间长达12小时，操作非常不便。

专利申请号为“201510238784.6”的申请文件中所记载的制备供试品的方法为：将杜仲样品剪碎、粉粹，过三号筛，取过筛后的粉末1g；将硅藻土和过筛后的粉末等重量比混合，装于10ml的萃取池中；在萃取池中加入正己烷静态萃取，正己烷萃取液舍弃；在萃取池中加入甲醇静态萃取，收集并采用甲醇定容至50ml，过滤，得到甲醇萃取液。也就是说，该对比文件采用正己烷使用ASE萃取除杂。但是在该方法的使用过程中，杜仲提取物中胶状物容易堵塞静态萃取阀的过滤器，而造成压力故障。

发明内容

针对上述不足，本发明旨在提供一种故除杂步骤同药典，仅使用ASE替代提取过程以缩短前处理时间，同时保证了测定的准确率的ASE-HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法。

为了解决上述技术问题，本发明所提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC法测定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的方法，依次包括下述步骤：

步骤1：采用ASE萃取方法萃取粉碎过的杜仲样品，其中，ASE萃取方法包括先在索氏提取器中采用三氯甲烷萃取，然后在快速溶剂萃取仪中用甲醇萃取，收集甲醇萃取液；

步骤2：采用HPLC法检测甲醇萃取液中的松脂醇二葡萄糖苷含量。

进一步的，所述的步骤1包括下述子步骤：

步骤S1：将杜仲样品剪碎、粉粹，过三号筛，取过筛后的粉末1g；

步骤S2：装于索氏提取器中，加入三氯甲烷，加热回流6小时，三氯甲烷萃取液舍弃；

步骤S3：将1g硅藻土和药渣混合，装于放有纤维滤膜的10mlASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；

步骤S4：用甲醇萃取，收集并采用甲醇定容至10ml，过滤，得到甲醇萃取液。

进一步的，所述的步骤S4中，萃取参数为：萃取温度为100℃，萃取时间为8min，萃取次数为3次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。

进一步的，所述的ASE萃取方法采用美国DIONEX公司的ASE350快速溶剂萃取仪进行。

进一步的，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为Syncronis C18，柱温为40℃，流速为0.3mL/min，流动相为甲醇-水，检测波长为277nm。

进一步的，所述的HPLC法的检测仪器为Agilent1290液相色谱仪。

进一步的，所述的色谱柱的规格为3*100mm，3μm。

进一步的，所述的流动相的甲醇-水的体积比为23:77。

本发明所述的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论板数按松脂醇二葡萄糖苷峰计算应不低于1000。

本发明的有益效果如下：

本发明采用ASE萃取方法萃取，通过采用三氯甲烷和甲醇分次萃取，先通过三氯甲烷萃取避免其他组分对检测的影响，使其他杂质的出峰不影响松脂醇二葡萄糖苷的出峰，同时避免了杜仲提取物中胶状物容易堵塞静态萃取阀的过滤器，而造成压力故障。

另外通过甲醇精确高效的萃取松脂醇二葡萄糖苷，使测量更加准确。

附图说明

图1为松脂醇二葡萄糖苷对照品图谱图；

图2为快速溶剂萃取样品图谱图；

图3为药典方法样品图谱图；

图4为浓度-峰面积进行线性回归。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。

实施例1

步骤1：取杜仲样品，剪成碎片，粉碎，过三号筛，取约1g，精密称定，按重量比1：1的比例加入硅藻土后混匀，装于10ml萃取池(装样前在萃取池底部加入适量的硅藻土，装样后用硅藻土填满萃取池)。