[发明专利]一种同型半胱氨酸测定试剂盒

说明书

本申请提供一种同型半胱氨酸测定试剂盒，含有试剂1和试剂2，所述试剂1含有TRIS、HCL、山梨酸钾、serine、NADH、LDH；所述试剂2含有TRIS、HCL、山梨酸钾、CBS、CBL。本申请提供的试剂盒相比于水解酶比色法只需要三步偶联即可完成检测，所需要原材料较少，成本较低。在HCY含量低于100umol/L时，均可采用线性定标，其操作简单，线性范围较宽。

技术领域

本发明涉同型半胱氨酸测定试剂盒。

背景技术

同型半胱氨酸(HCY)，是一种含巯基的氨基酸，其主要来源于饮食摄取的蛋氨酸，是蛋氨酸和半胱氨酸代谢过程中一个重要的中间产物，其本身并不参加蛋白质的合成。

在体内，约1/2的HCY和甲基四氢叶酸在蛋氨酸合成酶(Methionine Synthasereductase,MS)的作用下生成蛋氨酸和四氢叶酸。四氢叶酸在N5,N10-亚甲基四氢叶酸还原酶(Methylenetetralydrofolate,MTHFR)的作用下生成甲基四氢叶酸。其余约1/2的HCY通过转硫基途径，即HCY与丝氨酸在胱硫醚β合成酶(Cystathionineβ-synthase,CBS)的作用下形成胱硫醚，一部分在胱硫醚裂解酶的作用下形成半胱氨酸，最后生成丙酮酸、硫酸和水，此过程需维生素B6作为辅酶以及丝氨酸羟甲基转移酶，另一部分则生成同型丝氨酸。

任何原因引起前两条代谢途径障碍时，升高的HCY在氨基酰-tRNA合成酶的作用下，生成同型半胱氨酸硫内酯(homocysteine thiolactone,HTL)，HTL是HCY在氨基酰-tRNA合成酶编辑或校正过程中形成的反应产物，属一种环硫酯。HCY可以直接或间接导致血管内皮细胞损伤，促进血管平滑肌细胞增殖，影响低密度脂蛋白的氧化，增强血小板功能，促进血栓形成。

目前常用的检测同型半胱氨酸的方法包括以下几种：

同位素法：由Refsum等1985年建立的方法。该方法通过C¹⁴标记的腺苷与HCY缩合后，经色谱分离，液体闪烁计数放射强度来测HCY浓度。该方法灵敏度高，特异性强，但操作繁琐且有放射污染，未能推广使用。

色谱法：1987年Stabler首先报道了气相色谱―质谱法测定同型半胱氨酸。该法可同时测定半胱氨酸、蛋氨酸、胱硫醚和甲基甘氨酸等多种物质。虽然灵敏度、特异性好，但仪器价格昂贵而不能推广。高效液相色谱法(HPLC)是目前比较成熟且推广使用的方法，不足之处是样品处理、层析条件、样品检测及定量的诸多变异，使其难以标准化。Fiskertrand等首先于1993年用全自动高效液相色谱法对血浆和尿液中的HCY和硫醇物进行测定。HPLC根据衍生方式(柱前或柱后衍生)、检测方法(荧光、电化学)可分为多种方法。应用HPLC准确测定同型半胱氨酸需要优良的设备、高超的技术经验和应用HPLC方法适当的时间。因 此，由于该方法操作难度大，对设备的要求苛刻，不适合作为常规的医疗检测。

水解酶比色法：利用S-腺苷甲硫氨酸、还原型辅酶Ⅰ、α-酮戊二酸5.0mmol/L同型半胱氨酸甲基转移酶、谷氨酸脱氢酶、S-腺苷同型半胱氨酸水解酶、腺苷脱氨酶偶联反应测定，根据其反应速率快慢测定样本中HCY水平。此方法所需要的原材料较多且价格比较昂贵，大规模生产时成本较高，测定时为非线性定标，操作比较麻烦，由于存在非线性定标的局限性，用于试剂测定时线性也较窄，最高只可达到50umol/L。

发明内容

鉴于现有技术中存在的问题，本发明提供一种同型半胱氨酸测定试剂盒包括体积比为4:1的试剂1和试剂2，所述试剂1含有溶质TRIS、HCL、山梨酸钾、serine、NADH、LDH；所述试剂2含有溶质TRIS、HCL、山梨酸钾、CBS、CBL。