[发明专利]一种生长抑素28肽多克隆抗体及其制备方法

权利要求书

1.一种生长抑素28肽多克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括具体步骤如下：

S1.免疫抗原的制备：

(1)将血蓝蛋白KLH和生长抑素28肽分别用PBS溶解，

(2)在PBS溶解后的血蓝蛋白KLH溶液中加入碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺并调整pH为7～8，室温下反应15～30min，得到血蓝蛋白KLH处理液；

(3)将PBS溶解后的生长抑素28肽溶液调整pH值为7～8，滴加血蓝蛋白KLH处理液中，在室温状态下搅拌反应1～3h，PBS透析，冷冻干燥后得到血蓝蛋白KLH-生长抑素28肽固体粉末，并于-20℃保存备用；

(4)将血蓝蛋白KLH-生长抑素28肽固体粉末用PBS溶解，制得免疫抗原；

S2.免疫：先用免疫抗原和弗氏完全佐剂佐剂混合乳化后，采用颈部多点皮下注射免疫兔子，28天后用免疫抗原和弗氏不完全佐剂加强免疫，每隔14天后再加强免疫，共加强免疫四次；

S3.抗体粗品的制备：在步骤S2中首次免疫28天后和加强免疫7天后分别对兔耳部静脉取血，所取血液均在4℃下静置16～24h，离心后取上清液为含有生长抑素28肽多克隆抗体的血清蛋白，即得生长抑素28肽多克隆抗体粗品；

S4.将生长抑素28肽多克隆抗体粗品经提纯处理，得到生长抑素28肽多克隆抗体。

2.根据权利要求1所述生长抑素28肽多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤S1中(1)所述血蓝蛋白KLH和PBS的质量体积比为1：1mg/mL，所述生长抑素28肽与PBS的质量体积比为1：1mg/mL；步骤S1中(2)所述血蓝蛋白KLH、碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1：(0.5～1)：(1.5～2)；步骤S1中(4)所述血蓝蛋白KLH-生长抑素28肽固体粉末与PBS的质量体积比为1：1mg/mL。

3.根据权利要求1所述生长抑素28肽多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述免疫抗原与弗氏完全佐剂的体积比为1：1～2，所述弗氏完全佐剂佐剂与弗氏不完全佐剂的体积比为1～2：1，所述免疫抗原和弗氏不完全佐剂的体积比为1：1。

4.根据权利要求1所述的生长抑素28肽多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤S4中所述提纯的方法包括如下具体步骤：

S11.将血清蛋白用PBS稀释后，滴加饱和硫酸铵溶液，使硫酸铵溶液的浓度为50％，搅拌后静置，离心后取沉淀，

S12.用PBS溶解沉淀后，继续滴加饱和硫酸铵溶液，使硫酸铵溶液的浓度为33％，搅拌后离心，沉淀用PBS溶解，透析，冻干保存，所得粉体即为生长抑素28肽多克隆抗体；

或者，

S21.将血清蛋白用醋酸-醋酸钠缓冲液稀释，滴加辛酸，搅拌，离心取上清液，

S22.上清液用PBS稀释后，再滴加饱和硫酸铵溶液，使硫酸铵溶液的浓度为45％，搅拌后离心，得到的沉淀用PBS溶解，透析，冻干保存，所得粉体即为生长抑素28肽多克隆抗体。

5.根据权利要求4所述的生长抑素28肽多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤S11中所述血清蛋白和PBS的体积比为1：8～10，所述血清蛋白和饱和硫酸铵溶液的体积比为1：9～11，所述搅拌的时间为30～60min，所述静止的时间为16～24h；所述滴加的速率为200～400μL/秒。

6.根据权利要求4所述的生长抑素28肽多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤S12中所述沉淀与PBS的质量体积比为1：5～10mg/ml，所述PBS与饱和硫酸铵的体积比为1：0.6～0.4，所述冻干的温度为-40～-80℃，所述冻干的时间为10～20h，所述滴加的速率为200～400μL/秒。

7.根据权利要求4所述的生长抑素28肽多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤S21中所述血清蛋白、醋酸-醋酸钠缓冲液和辛酸的体积比为1：(4～6)：40，所述醋酸-醋酸钠缓冲液的浓度为40～100mmol/L，所述醋酸-醋酸钠缓冲液的pH为4.0～5.6，所述滴加的速率为40～80μL/秒。

8.根据权利要求4所述的生长抑素28肽多克隆抗体的制备方法，其特征在于，步骤S22中所述上清液和PBS的体积比为1：(1～1.2)，所述上清液和饱和硫酸铵体积比为1：(1.5～2)，所述冻干的温度为-40～-80℃，冻干的时间为10～20h，所述滴加的速率为200～400μL/秒。