[发明专利]一种CTCF蛋白可结合DNA片段及在CTCF活性检测中的应用

权利要求书

1.一种CTCF蛋白可结合的DNA片段，其特征在于，包含多个CTCF蛋白结合框，每个所述CTCF蛋白结合框的序列独立地选自SEQ ID NO:1-16，每两个相邻的CTCF蛋白结合框之间具有间隔序列，并且每两个相邻的CTCF蛋白结合框之间的所述间隔序列为AT，所述DNA片段的序列如SEQ ID NO:17所示。

2.权利要求1所述的DNA片段在检测细胞内CTCF转录调控活性中的应用。

3.一种用于检测细胞内CTCF转录调控活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：将包含权利要求1所述的DNA片段以及连接于所述DNA片段下游的报告基因表达框的报告基因系统导入所述细胞；

S2：通过检测所述报告基因的表达来计算所述细胞内CTCF转录调控活性。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述报告基因系统为双荧光素酶报告基因系统，包括重组质粒和对照质粒，并且所述重组质粒带有所述DNA片段以及连接在所述DNA片段下游的荧光素酶I的表达框，所述对照质粒带有荧光素酶II的表达框，所述荧光素酶I与所述荧光素酶II激发产生的荧光波长不同。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述重组质粒通过将所述DNA片段插入至质粒pGL3-Basic的Kpn I与Hind III位点之间得到。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述对照质粒为phRL-TK。

7.根据权利要求4-6中任一项所述的方法，其特征在于，S1具体包括：

S11：将所述细胞培养至贴壁，并恢复形态；

S12：将所述重组质粒和对照质粒转染至细胞中。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，S2具体包括：

S21：转染后将细胞继续培养24-36小时，洗涤细胞；

S22：分别检测转染后的细胞中的荧光素酶I和荧光素酶II的活性；

S23：将荧光素酶II活性归一化荧光素酶I活性得到的值，作为衡量CTCF转录调控活性的指标。