[发明专利]一种MZF1蛋白可结合DNA片段及在MZF1活性检测中的应用

说明书

本发明涉及一种MZF1蛋白可结合的DNA片段，包含多个MZF1蛋白结合框；还涉及该DNA片段的应用；还涉及一种用于检测细胞内MZF1转录调控活性的方法。通过使用本发明的DNA片段和方法，可直接针对性地检测细胞内MZF1的转录调控活性，而非仅仅检测其转录本或蛋白质的含量，从而使得能够更准确地分析MZF1作为转录因子在一些病理学发展中所起的作用。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，更特别地，涉及一种MZF1蛋白可结合的DNA片段及其在检测细胞内MZF1转录调控活性中的应用。

背景技术

髓样锌指蛋白1(MZF1)是由人类19号染色体MZF1基因编码的一种具有锌指结构的蛋白，属于C2H2类锌指结构蛋白家族，在人类细胞中大量存在。MZF1蛋白全长734个氨基酸，大约82055Da，与靶基因结合后，通过其特有的锌指结构与靶基因启动子区域DNA相结合，在骨髓造血过程中发挥基因激活或抑制效应。

MZF1基因发生突变后，会引起某些调节紊乱，甚至疾病的发生。然而，目前检测细胞内源性MZF1活性仍然依靠Western Blot或者qRCR等技术，虽然灵敏度高，但检测到的只是MZF1蛋白含量的差异，并不能直接体现其结合到靶序列后活性的改变。

因此，需要设计一种新的用于检测细胞内MZF1转录调控活性的方法。

发明内容

发明人通过研究发现，MZF1蛋白结合的DNA序列存在高度的保守性，其结合的DNA核心序列为5'-AGTGGGGA-3'或5’-CGGGNGAGGGGGAA-3’(N表示A、T、C、G，如SEQ ID NO:1-4所示)。

基于以上研究，本发明提供了一种MZF1蛋白可结合的DNA片段，其包含多个MZF1蛋白结合框，其中至少一个MZF1蛋白结合框的序列为5'-AGTGGGGA-3'，其余的MZF1蛋白结合框的序列5’-CGGGNGAGGGGGAA-3’(N表示A、T、C、G，如SEQ ID NO:1-4所示)。

优选地，当包含多个MZF1蛋白结合框时，每两个相邻的MZF1蛋白结合框之间具有间隔序列。

优选地，每两个相邻的MZF1蛋白结合框之间的间隔序列为所述间隔序列为TA。

优选地，所述DNA片段的序列如SEQ ID NO:5所示。在研究过程中，我们试验了多种组合，结果发现该序列的DNA片段比其他组合方式对MZF1蛋白的结合效率更高。

本发明还提供了上述DNA片段在检测细胞内MZF1转录调控活性中的应用。

本发明还提供了一种用于检测细胞内MZF1转录调控活性的方法，其包括以下步骤：

S1：将包括上述DNA片段以及连接于所述DNA片段下游的报告基因表达框的报告基因系统导入所述细胞；

S2：通过检测所述报告基因的表达来计算所述细胞内MZF1转录调控活性。可将报告基因的表达强度作为指示MZF1转录调控活性的指标。

优选地，所述报告基因系统为双荧光素酶报告基因系统，包括重组质粒和对照质粒，并且所述重组质粒带有所述DNA片段以及连接在所述DNA片段下游的荧光素酶I的表达框，所述对照质粒带有荧光素酶II的表达框，所示荧光素酶I与所述荧光素酶II激发产生的荧光波长不同。将MZF1转录调控活性表示为荧光素酶I激发产生的荧光强度与荧光素酶II激发产生的荧光强度的比值。

优选地，所述重组质粒通过将所述DNA片段插入至质粒pGL3.0-Basic的Kpn I与Hind III位点之间得到。

优选地，所述对照质粒为phRL-TK。

优选地，S1具体包括：

S11：将所述细胞培养至贴壁，并恢复形态；