[发明专利]一种促进褐腐病菌生长的培养基

说明书

技术领域

本发明属于微生物工程技术领域，具体涉及一种促进褐腐病菌生长的培养基。

背景技术

褐腐病菌是引起桃、梨、樱桃等核果类果树的一种重要病原菌，现有研究主要采用PDA和YGA的培养基对其进行培养，但其一般需要培养6天才能长至直径8cm左右，而且产孢量较少，存在褐腐病菌生长速度慢、孢子产量不够开展相关研究所用的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种促进褐腐病菌生长的培养基，其可实现褐腐病菌生长速度的显著提高，并能促进其分生孢子的产生，有效解决现有褐腐病菌生长速度慢、培养周期长、产孢量少的问题。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种促进褐腐病菌生长的培养基，其是通过将混合果蔬汁加入到灭菌后的YGA培养基中，制得所述促进褐腐病菌生长的培养基；其中，混合果蔬汁的加入量为YGA培养基体积的20%-40%，优选20%。

所述灭菌后的YGA培养基的制备方法为：将5g酵母粉、15g葡萄糖、15g琼脂粉定容于1L水中，于121℃高压湿热灭菌20min后凉至60℃。

所述混合果蔬汁是将无菌番茄汁、无菌草莓汁及无菌山楂汁按重量比5:2:1混合制得。

本发明的显著优点在于：本发明通过将一定量的混合果蔬汁加入到灭菌后的YGA培养基中，制得能够显著提高褐腐病菌生长速度、及其分生孢子产生的培养基，其制备快速、方便、经济，可实现褐腐病菌的快速培养，有助于提高相关研究的工作效率。

附图说明

图1为不同桃褐腐病菌在不同培养基上的生长情况对比图。

图2为不同桃褐腐病菌在不同培养基上的产孢情况对比图。

具体实施方式

为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。

按照文献（Chen FP, Fan JR, Zhou T, Liu XL, Liu JL and Schnabel G, Baseline sensitivity of Monilinia fructicola from China to the DMI fungicide SYP-Z048 and analysis of mutants. Plant Disease, 2012,96(3): 416-422）所述方法，从桃上分离获得3株桃褐腐病菌菌株（Monilinia fructicola），分别标记为NY9、MD2、PA7。

1 不同培养基制作：

PDA培养基的制备：38 g PDA粉，定容于1L水中，于121℃高压湿热灭菌20 min后待其凉至60℃左右，制成平板；

YGA培养基的制备：酵母粉5g，葡萄糖15g，琼脂粉15g，定容于1L水中，于121℃高压湿热灭菌20 min后待其凉至60℃左右，制成平板；

混合果蔬汁培养基：酵母粉5g，葡萄糖15g，琼脂粉15g，定容于1L水中，于121℃高压湿热灭菌20min后待其凉至60℃左右，分别按其体积10%、20%、30%和40%的量加入混合果蔬汁，混合均匀后配成不同含量混合果蔬汁的平板，依次标为YGVA1、YGVA2、YGVA3和YGVA4。

2 试验方法

将3株桃褐腐病菌在PDA培养基中活化后，接种至新的PDA培养基上培养6d，于菌落边缘同一圆周上打取直径5 mm的菌饼，分别接种于PDA培养基、YGA培养基、YGVA1培养基、YGVA2培养基、YGVA3培养基、YGVA4培养基的平板上，22℃暗培养3d，分别测量各平板上的菌落直径，并采用SPSS软件中的最小显著差异法进行统计分析，以获得各菌株在不同培养基上的生长情况。每皿接种一个菌饼，每菌株每种培养基3次重复，整个试验重复2次。

另采用直径5 mm的蓝色枪头分别从上述培养平板中心接菌处向外依次辐射状打取一定数量的菌饼，并记录打取的菌饼数，然后置于加有10 mL无菌水（添加0.1%吐温-20）的离心管中，加入5-8粒预先灭菌的玻璃珠，震荡2 min，以洗脱孢子，用血球计数板计算孢子数，每处理重复3次，计算每平方厘米的平均孢子产量，并采用SPSS软件中的最小显著差异法进行统计分析。整个试验重复2次。

3 试验结果