[发明专利]一种细胞因子免疫层析试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医学检测领域，具体涉及一种细胞因子免疫层析试纸及其制备方法。

背景技术

细胞因子(cytokine，CK)是免疫原、丝裂原或其他刺激剂诱导多种细胞产生的低分子量可溶性蛋白质，具有调节固有免疫和适应性免疫、血细胞生成、细胞生长、APSC多能细胞以及损伤组织修复等多种功能。细胞因子可被分为白细胞介素、干扰素、肿瘤坏死因子超家族、集落刺激因子、趋化因子、生长因子等。细胞因子具有重要的生物学功能，例如白介素6(IL-6)是一种由免疫系统细胞、血管内皮细胞及脂肪细胞产生的多效应细胞因子。它能在免疫反应、急性反应、造血作用、肿瘤发生和炎症反应中起到关键作用，IL-6水平在自身免疫性疾病、心血管疾病、急性感染、烧伤、急性髓样白血病、器官移植排斥等疾病中均有改变，且IL-6水平变化与病程密切相关。因此，对IL-6等细胞因子进行快速、灵敏检测能够对病情变化进行监测，及早发现异常并采取治疗措施，具有重大意义。

目前，如细胞因子这样的蛋白质小分子的检测方法主要有ELISA、免疫荧光检测、免疫电化学检测、表面等离子共振等，这些方法均涉及抗体孵育、样品孵育、标记以及许多洗脱的步骤，操作繁琐，难以达到快速、简便的检测，并且难以在空间和设备有限的条件下进行检测。

但目前免疫层析试纸条的检测限通常在几十ng/mL，灵敏度不足，难以检测水平较低的细胞因子。超顺磁纳米颗粒(Superparamagnetic nanobead,SPMNB)是一种新兴的纳米材料，具有良好的磁学性质和磁分离特性，在磁场存在下可被固定，而撤销磁场时又能快速重悬，分散于溶液中。利用修饰相应的细胞因子抗体的超顺磁纳米颗粒，可以简便的实现细胞因子免疫层析试纸的快速、可视化检测。

发明内容

为了克服现有技术上的问题，本发明提供了一种细胞因子免疫层析试纸及其制备方法，在高灵敏度检测的同时大大缩短了检测时间，并且可以及时给出定量结果，检测仪器简单可靠，操作简易，方便实用。

本发明提供以下技术方案：

一种细胞因子免疫层析试纸，依次包括样品区、结合区、检测区，在所述样品区，检测液添加在样品垫上，用于检测液在结合垫上均匀分布并去除样品中的杂质颗粒；

在所述结合区样品垫部分叠压在结合垫之上，结合垫表面涂布纳米颗粒与目标细胞因子单克隆抗体的偶联物，检测液中的目标细胞因子与所述单克隆抗体特异性结合，结合垫用于吸附部分所述偶联物；

在所述检测区结合垫部分叠压在蛋白持留用膜上，所述蛋白持留用膜先后间隔设有检测线和质控线，所述检测线包被有目标细胞因子的多克隆抗体，当检测液中的目标细胞因子与所述多克隆抗体结合后，检测线处显色，目标细胞因子被检出；所述质控线上包被与所述单克隆抗体特异性结合的二抗抗体，当检测液中所述偶联物的单克隆抗体抗体与所述二抗抗体结合，质控线处显色，效验检测过程是否有效。

进一步地，在检测区下游还设有吸收区，在所述吸收区吸收垫部分叠压在蛋白持留用膜上，吸收垫用于控制检测液流速、促进虹吸作用，及避免检测液滞留在检测区表面。

进一步地，所述样品垫和结合垫的材质为玻璃纤维、无纺布、聚酯膜或纤维素滤纸；所述吸收垫为滤纸或层析纸。

进一步地，所述纳米颗粒为超顺磁纳米颗粒，所述超顺磁纳米颗粒的直径为100-300nm，结合垫涂布浓度为10μL/cm-30μL/cm。

进一步地，所述蛋白持留用膜为硝酸纤维素膜、PVDF膜或尼龙膜。

进一步地，所述细胞因子为白细胞介素、干扰素、集落刺激因子、肿瘤坏死因子、趋化因子或生长因子。

进一步地，目标细胞因子为白介素6，所述超顺磁纳米颗粒表面修饰氨基，通过碳二亚胺法与白介素6的单克隆抗体共价偶联，所述检测线包被白介素6多克隆抗体。

进一步地，检测线和质控线显色结果通过灰度处理进行目标细胞因子的半定量分析。

进一步地，通过磁性分析仪MAR对检测线和质控线的磁性进行定量分析。

一种细胞因子免疫层析试纸的测试试纸条，所述测试试纸条包括测试卡槽、试纸条本体、试纸条盖板，所述试纸条本体由下至上依次为宽度相同、长度不同的底板条、蛋白持留用膜、结合垫、样品垫和吸收垫，所述结合垫部分叠压在所述蛋白持留用膜一端上部，所述样品垫依次部分叠压在所述结合垫延长端上部，所述吸收垫部分叠压在所述蛋白持留用膜另一端上部；