[发明专利]一种常见眼内感染病毒多重实时荧光PCR检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种常见眼内感染病毒多重实时荧光PCR检测试剂盒，该试剂盒含有可以同时检测HSV1、HSV2、VZV、CMV和EBV病毒的引物和探针。这种试剂盒可以在一个反应中同时对5种常见眼部感染病毒进行定量分析，弥补当前检测技术的不足。另一方面，该检测试剂盒可以直接应用于组织液检测，这样也大大提高了检测效率。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别涉及一种眼内病毒多重PCR检测技术。

背景技术

眼内病毒感染性疾病是常见的眼科疾病，如未得到及时诊治，可对眼组织造成严重损伤，甚至失明；而若能够及早诊断，并施以有效的治疗，多数是能够治愈的。

眼内病毒感染最常见的病原体主要是人类疱疹病毒(Human herpes virus，HHV)家族。人类疱疹病毒可分为8型，HHV1～8型分别为单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplexvirus，HSV-Ⅰ)、单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)、水痘-带状疱疹病毒(varicella-herpeszoster virus，VZV)、Epstein-Barr病毒(EBV)、人类巨细胞病毒(cytomegalovirusretinitis，CMV)、人类疱疹病毒6型(HHV-6)、人类疱疹病毒7型(HHV-7)和人类疱疹病毒8型(HHV-8)。其中最常引起眼内病毒感染的是HSVⅠ及Ⅱ型、VZV、CMV及EBV。

眼内病毒感染可以引起从眼前段到眼后段的炎症。由于眼内病毒感染可以造成视功能的巨大损害，因此及时早期的抗病毒治疗是关键的一步。而目前国内对于眼内病毒感染性疾病主要是医生依靠患者病史及临床表现做出诊断，在缺乏明确的实验室病原学诊断依据的情况下对部分患者采用经验性的抗病毒治疗。然而即使出现了典型的临床表现，也不能百分之百明确诊断。事实上，具有典型临床表现的眼内病毒感染性疾病并不多见，而具有不典型临床表现的患者大有人在，因此临床医生在诊断时常常感到棘手。如果在未明确病因之前，盲目地单纯使用糖皮质激素或免疫抑制剂可能造成感染扩散、耽误病情。当前中国已经进入了精准医疗计划的时代，我国眼内病毒感染性疾病的诊断和治疗不能再局限于病人的主诉和临床症状体征，实现对眼内病毒感染性疾病的病原学诊断尤为重要。通过对眼内液病毒的检测最终实现眼内病毒感染性疾病的诊断、治疗效果评价及指导用药。

当前国内眼内病毒感染性眼病眼内液检测主要采用的是商品化的PCR检测试剂盒，已有的试剂盒每次只能检测一种到三种疱疹病毒。而且传统的荧光PCR检测，都是以病毒DNA为样本进行定性检测，不能对病毒进行定量分析，而病毒的数量对治疗方案的确定有极大帮助。对DNA进行定性检测，则需要较大量的组织标本来提取足够量的病毒DNA，否则会因为DNA获取量太少而造成假阴性的结果，而从眼部器官获取较大量的组织样本有不小的挑战。

在不同的眼部组织中，病毒感染的种类又往往有很大差异，具体到眼内液体(前房水和玻璃体)感染，最常见的病毒类型为HSV1、HSV2、VZV、CMV和EBV五种。本发明提出一种新型的多重荧光PCR病毒检测技术，直接以标本组织液为PCR模板，在一个反应管里对5种常见眼部感染病毒进行定性检测，并同时进行病毒进行定量分析，弥补当前检测技术的不足，是一种非常有应用前景的快速诊断方法。

发明内容

本发明的目的在于公开一种眼内病毒多重PCR检测试剂盒。

本发明所采取的技术方案是：

一种常见眼内感染病毒多重实时荧光PCR检测试剂盒，该试剂盒含有可以同时检测HSV1、HSV2、VZV、CMV和EBV病毒的引物和探针。

优选的，检测HSV1的引物是：

正向引物：5’-CCCTCCGGCTCCCGCTCG-3’(SEQ ID NO：1)；

反向引物：5’-GAGGCGCCCAAGCGTCCG-3’(SEQ ID NO：2)；