[发明专利]一种硫辛酸修饰的固有无序蛋白纳米载体及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及医药技术领域，具体是一种硫辛酸修饰的固有无序蛋白纳米载体及其制备方法和应用。本发明的纳米载体采用硫辛酸自带的二硫键进行交联，所形成的多肽聚合物可在细胞内迅速被降解，不会在细胞内蓄积，组成多肽载体的氨基酸均为体内存在的氨基酸，对细胞及人体无毒副作用，CCK‑8法细胞增殖试验表明，制备的纳米载体具有很低的细胞毒性，同时又有较好的共载基因与化疗药的能力，本发明的纳米载体在乳腺癌治疗中能成功递送siRNA抑制化疗药物引起的自噬特异性增强肿瘤细胞对化疗药的敏感性，促进乳腺癌细胞的凋亡，从而成为乳腺癌治疗的一种靶向、高效、低毒的纳米级递送系统。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体地说，是一种硫辛酸修饰的固有无序蛋白 纳米载体及其制备方法和应用。

背景技术

乳腺癌是威胁女性健康的恶性肿瘤之一，目前临床对其治疗仍以手术为 主，同时配合放射治疗、化疗药物治疗(简称化疗)进行综合治疗，其中化疗 在乳腺癌治疗中起着关键作用，但是常规的化疗放疗药物没有选择性，不可避 免伤害正常细胞。因此，开发针对肿瘤细胞治疗的靶向载体可大大提高对肿瘤 的效果。纳米技术的引入，不仅实现了肿瘤的靶向性治疗、还可以降低化疗药 的毒副作用。因此，制备一种能靶向性治疗乳腺癌的纳米递药系统具有非常重 要的意义。

纳米技术的出现为药物向细胞内的有效输送提供了机遇。药剂学领域中纳 米技术产品包括但不局限于纳米颗粒、胶束、脂质体、纳米纤维、纳米管、纳 米芯片和自组装聚合物纳米装置等，这些纳米载体具有多种优点：粒径小，粒 径分布窄，表面修饰后可进行靶向特异性定位，保护药物分子，提高其稳定性， 可被赋予生理刺激响应性和外加能量(热、光、声、磁)响应性，单一载体能 同时包载多种治疗剂，可将显像和治疗相结合以实时监测疗效。

胶束(micelles)亦称胶团，是过量的表面活性剂在水中自组装形成的胶 体溶液，表面活性剂分子缔合形成胶束时的最低浓度称为临界胶束浓度 (CMC)。文献中常将胶束形成的过程称为“自组装”。纳米胶束是由具有亲水 基团和疏水基团的两亲嵌段共聚物在水中自组装形成的纳米级大小的核－壳 型胶束。

多肽作为载体的好处是小分子。人体内存在多种多肽，这些多肽容易被代 谢和从体内清除，无明显副作用。多肽一般没有免疫原性，也不能穿过血脑屏 障，天然多肽最大的问题是半衰期时间很短，但是通过改造修饰后会比较稳定， 这些经过修饰和改造后的长效多肽能够用作有效的药物载体。细胞穿膜肽(cell penetrating peptides,CPPs)是一类具有较强的细胞膜穿透能力的小分子短肽， 可携带多种大分子进入细胞。在1988年，GreenLoewenstein等人报道了I型 免疫缺陷病毒转录激活因子TAT能单独进入细胞，这是CPPs发展史上第一个 里程碑。1994年，Fawell等报道TAT蛋白能介导外源性的蛋白进入细胞，且负责转导的部位是TAT蛋白的47-57位氨基酸，被称作“TAT蛋白转导结构” (peptidetransduction domain，PTD)，即蛋白转导域，也成为细胞穿膜肽 (cell-penetratingpeptides，CPPs)。这是CPPs发展史上第二个里程碑。这类肽 很快用到药物的靶向和导入的研究中，可以有效地将包括亲水性蛋白质和多 肽、核苷酸、小分子药物、量子点和显像剂等在内的多种货物分子导入各种细 胞中，开辟了药物进入细胞的新介导途径。其在基因治疗方面因其高效传递基 因物质的能力及低毒性，容易制备而在过去20多年中成为研究热点。研究发 现，多肽类载体中的精氨酸因其表面富集的正电荷可有效地吸附带负电荷的基 因物质而形成粒径小，结构稳定的载体/基因复合物。此类聚合物除了具有非 病毒载体共有的优点外,其表面往往带有较多氨基，在生理的条件可以质子化带 正电荷,从而压缩或者以达到包裹基因的目的。此外阳离子聚合物与DAN或 RNA会形成一种核壳结构，外壳是亲水的阳离子片段，内部疏水的核则是部 分被中和的DNA或RNA，这一结构可以提高其稳定性，从而避免被体内的酶 降解。