[发明专利]一种乙酰化粒毛盘菌胞外多糖及其制备心血管药物用途

说明书

技术领域

本发明属于粒毛盘菌胞外多糖的应用技术领域，具体涉及乙酰化粒毛盘菌胞外多糖及其在制备心血管保护药物方面的用途。

背景技术

糖尿病(DM)是当代社会最重要的慢性代谢性疾病，源于体细胞无法正常利用葡萄糖。作为糖尿病患者死亡的主要原因，心血管疾病因其高死亡率已引起人们的广泛关注。许多口服降糖药，包括磺脲类、非磺脲类胰岛素促泌剂、双胍类、α-葡萄糖苷酶抑制剂和胰岛素增敏剂已被开发用于治疗糖尿病。然而，糖尿病相关并发症，尤其是心血管疾病的治疗仍是一项重要挑战。因此，研究开发新型无毒副作用的心血管保护药物具有重要意义。

大量的天然提取物，尤其是多糖能够有效治疗糖尿病。据《碳水化合物杂志》 (Carbohydrate Polymers,2011,86:285-290)报道，萼状粒毛盘菌胞外多糖 (LEP-1)对四氧嘧啶致糖尿病小鼠具有强的降糖作用。但是，多糖对糖尿病相关并发症是否具有治疗效果，还有待于进一步研究。

中国专利申请号201510030199.7公开了一种磷酸酯化瓜蒌皮多糖 (PTTP-1)，并通过对衰老模型小鼠的抗衰老作用药理实验，表明磷酸酯化修饰能够显著提高瓜蒌皮多糖的抗衰老作用。中国专利申请号201510418916.3公开了一种硫酸酯化粒毛盘菌胞外多糖(SLEP-1)，并通过对高凝模型小鼠的抗凝作用药理实验，表明硫酸酯化修饰能够显著提高粒毛盘菌胞外多糖的抗凝作用。本发明人课题组于2016年10月31日将一株粒毛盘菌YM216(本发明人课题组自定编号代码)菌株保藏于湖北省武汉市武汉大学生命科学学院中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC)，菌种保藏编号为CCTCC M 2016603。目前，有关粒毛盘菌胞外多糖修饰改性的报道相对较多，但未见有公开文献提及将粒毛盘菌胞外多糖修饰改性为乙酰化粒毛盘菌胞外多糖，以及将其作为制备心血管保护药物的应用方面的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种采取乙酰化修饰改性的粒毛盘菌胞外多糖及其在制备心血管保护药物中的应用。

本发明的乙酰化粒毛盘菌胞外多糖，是将菌种保藏编号为CCTCC M 2016603的粒毛盘菌Lachnum sp.YM216接种于100L发酵罐中发酵8-10d；抽滤、浓缩后，将浓缩的发酵液与3-4倍体积的体积百分浓度为95％的乙醇混合，然后于4℃醇沉24-48h；4000r/min离心10-15min后，滤出沉淀，并将沉淀复溶于蒸馏水；经Sevage法除蛋白、以质量百分浓度为30％的H₂O₂脱色、透析除杂、冷冻干燥得到粒毛盘菌胞外粗多糖；然后通过DEAE-纤维素52柱层析和琼脂糖凝胶CL-6B柱层析依次对得到的粗多糖进行分离纯化获得均一的粒毛盘菌胞外多糖；其特征在于通过以乙酸酐对粒毛盘菌胞外多糖进行如下的乙酰化修饰改性获得乙酰化粒毛盘菌胞外多糖：即，将2-3g粒毛盘菌胞外多糖与80-150 mL甲酰胺混合，于60℃搅拌30-60min后，加入50-80mL由N-溴代丁二酰亚胺(NBS)和乙酸酐(1:1，mg/mL)配制而成的溶液，于60℃反应6-8h后，加入20-30mL蒸馏水终止反应；冷却至室温后，使用体积百分浓度为95％的乙醇将溶液于4℃醇沉24-48h；4000r/min离心10-15min，滤出沉淀，并将沉淀复溶于100-150mL蒸馏水；使用1mol/L NaOH溶液中和该溶液，于截留分子量为14000Da透析袋中先用自来水逆向流动透析48h，再用蒸馏水透析24h；将获得物浓缩并冻干，所得到的乙酰化粒毛盘菌胞外多糖。

本发明的乙酰化粒毛盘菌胞外多糖的医药用途，其特征在于是由菌种保藏编号为CCTCC M 2016603的粒毛盘菌YM216胞外多糖进行乙酰化修饰改性获得的乙酰化粒毛盘菌胞外多糖，在制备心血管保护药物中的应用；通过对糖尿病模型小鼠的心血管保护作用药理实验，确立了乙酰化粒毛盘菌胞外多糖的心血管保护作用，从而将乙酰化粒毛盘菌胞外多糖用于制备心血管保护药物，即，按药剂学的常规制备方法，将有效量的该乙酰化粒毛盘菌胞外多糖作为活性物质与药用辅料混合加工，制备成片剂或胶囊剂。

与已有技术相比，本发明的有益效果体现在：

本发明的乙酰化粒毛盘菌胞外多糖具有显著的心血管保护作用，且无毒副作用，不会对体内器官造成损伤。本发明方法简单经济，可将该乙酰化粒毛盘菌胞外多糖应用于制备片剂或胶囊剂型的心血管保护药物。

附图说明

图1为粒毛盘菌胞外多糖和乙酰化粒毛盘菌胞外多糖的红外光谱；