[发明专利]一种促进猪粪堆肥发酵的微生物复合菌剂

权利要求书

1.一种促进猪粪堆肥发酵的微生物复合菌剂，其特征在于：所述微生物复合菌剂是由嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)、嗜热球形脲芽胞杆菌(Ureibacillus thermophaericus)、成团泛菌(Pantoea agglomerans)、吉氏库特氏菌(gibsonii)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)和液体培养基制成。

2.一种如权利要求1所述的促进猪粪堆肥发酵的微生物复合菌剂的制备方法，其特征在于：将嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)和嗜热球形脲芽胞杆菌(Ureibacillus thermophaericus)分别接种于液体培养基中并于55℃下振荡发酵培养18～24h，将成团泛菌(Pantoea agglomerans)、吉氏库特氏菌(gibsonii)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)分别接种于液体培养基中并于35℃下振荡发酵培养18～24h，将该6株菌株的发酵液按体积比1:1:1:1:1:1的比例均匀混合，即制成促进猪粪堆肥发酵的微生物复合菌剂。

3.如权利要求2所述的促进猪粪堆肥发酵的微生物复合菌剂的制备方法，其特征在于：所述嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)、嗜热球形脲芽胞杆菌(Ureibacillus thermophaericus)、成团泛菌(Pantoea agglomerans)、吉氏库特氏菌(gibsonii)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)该6株菌株的筛选方法如下：

步骤S1：采集样品：将猪粪和切碎的水稻秸秆混合形成堆肥，分别于堆肥升温期的30℃、35℃、45℃，高温期的50℃、55℃、57℃、59℃，以及开始降温的57℃、55℃、50℃、45℃、35℃、30℃下取堆肥样，将采集的每个样品加入经灭菌过的试剂瓶中，同时向其中加入无菌水，于恒温下振荡30min，每次取样的样品振荡时设定的温度为当次样品取样时的堆肥温度；

步骤S2：制备梯度浓度稀释液：每个样品振荡后的悬浊液取出，作为10^-1浓度的稀释菌悬液，吸取1mL 10^-1浓度的稀释液于无菌试管中，加入9mL无菌水，加盖摇匀，即得10^-2浓度的稀释菌悬液，吸取1mL 10^-2浓度的稀释液于无菌试管中，加入9mL无菌水，加盖摇匀，即得10^-3浓度的稀释菌悬液，以此重复，制备出从10^-1到10^-8的浓度梯度的稀释菌悬液；

步骤S3：菌落培养：每个样品分别吸取10^-5、10^-6、10^-7浓度的稀释菌悬液，并将每个样品的稀释菌悬液分别置于牛肉膏蛋白胨培养基、PDA培养基和高泽氏一号培养基中，用涂布棒涂匀，并将上述培养基分别于恒温培养箱中倒置培养，培养箱设置的温度为该次样品从堆肥中采集时的堆肥温度；

步骤S4：菌落复筛：待上述培养基中长出清晰可见的菌落后，从所有的培养基中选取至少10株续代长势良好的优势菌种，将每株优势菌种按5％的投加量投加至步骤S1中所述堆肥中，监测堆肥发酵过程中水溶性铵态氮的含量和水溶性硝态氮的含量变化，以堆体水溶性铵态氮质量浓度与水溶性硝态氮质量浓度的比值小于0.5作为堆肥腐熟标准，以此筛选出6株具有快速腐熟能力的有效菌株，初步鉴定该6株菌株分别为嗜热裂孢菌(Thermobifida fusca)、嗜热球形脲芽胞杆菌(Ureibacillus thermophaericus)、成团泛菌(Pantoea agglomerans)、吉氏库特氏菌(gibsonii)、解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)和短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)。

4.如权利要求3所述的促进猪粪堆肥发酵的微生物复合菌剂的制备方法，其特征在于：所述步骤S1中，将猪粪和切碎的水稻秸秆按质量比7:1混合。