[发明专利]冰片中微生物限度检查方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物限度检查方法，尤其是一种冰片中微生物限度检查方法，属于化学检测技术领域。

背景技术

冰片(合成龙脑)作为药用原料药。根据2015年版《中国药典》四部1105非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法，应进行需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数的检查。

发明内容

针对上述技术问题，本发明的目的是提供一种操作简单，方法可行的冰片中微生物限度检查方法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是这样的：

一种冰片中微生物限度检查方法，依次包括下述步骤：

1)菌液制备

取经33℃培养24h的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌胰酪大豆胨液体培养液及25℃培养24h的白色念珠菌沙氏葡萄糖液体培养液，用0.9％无菌氯化钠溶液制成含菌数为1000～10000cfu/ml的菌悬液，备用；取经25℃培养7天的黑曲霉沙氏葡萄糖琼脂斜面，加入5ml含0.05％聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，用带有棉花的球形吸管吸出孢子悬液，用含0.05％聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液制成含孢子数为1000～10000cfu/ml的孢子悬液，备用；

2)供试液制备

取本品10g，加入10ml十四烷酸异丙酯，再加入预热至45℃的胰酪大豆胨液体培养基至100ml，45℃气浴振摇10min，混匀，静置取上清液作为1:10供试液；

4)方法建立及回收率试验

采用中和法和稀释法进行冰片的非无菌产品微生物限度检查中需氧菌总数检查；采用中和法进行霉菌和酵母菌总数检查。

进一步的，上述的一种冰片中微生物限度检查方法，所述的中和法依次包括下述步骤：

试验组：吸取1:10供试液9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；另从真菌试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；每株试验菌平行制备2个平皿；

菌液对照组：吸取胰酪大豆胨液体培养基9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；另从真菌试管中分别吸取1ml至平皿中，倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；每株试验菌平行制备2个平皿；

中和剂对照组：吸取10ml十四烷酸异丙酯，加入胰酪大豆胨液体培养基中至100ml，吸取胰酪大豆胨液体培养基9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；另从真菌试管中分别吸取1ml至平皿中，倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；每株试验菌平行制备2个平皿；

供试品组：吸取1:10供试液1ml至平皿，平行制备4个平皿，其中2个倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，另外2个倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；

稀释剂组：吸取胰酪大豆胨液体培养基1ml至平皿，平行制备4个平皿，其中2个倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，另外2个倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；

中和剂组：吸取10ml十四烷酸异丙酯，加入胰酪大豆胨液体培养基中至100ml，吸取胰酪大豆胨液体培养基1ml至平皿，平行制备4个平皿，其中2个倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，另外2个倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；

各平皿倾注规定的琼脂培养基，待凝固后，分别置规定温度培养3－5d，测定需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数，计算其回收率，其计算公式为：

进一步的，上述的一种冰片中微生物限度检查方法，所述的中和法和稀释法依次包括下述步骤：

供试液制备

取本品10g，加入10ml十四烷酸异丙酯，再加入预热至45℃的胰酪大豆胨液体培养基至100ml，45℃气浴振摇10min，混匀，静置取上清液作为1:10供试液；吸取1:10供试液40ml加入40ml胰酪大豆胨液体培养基中，摇匀制成1:20供试液；

中和法和稀释法：

试验组：吸取1:20供试液9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；

菌液对照组：吸取胰酪大豆胨液体培养基9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；