[发明专利]肝细胞特异性培养基质凝胶及其制备方法

权利要求书

1.一种肝细胞特异性培养基质凝胶制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

获取去细胞化的肝脏支架，并且将所述肝脏支架制成干燥粉末；

将所述干燥粉末用胃蛋白酶溶液进行酶解得到酶解液；

调整所述酶解液的pH值和离子浓度，孵育后形成凝胶。

2.根据权利要求1所述的肝细胞特异性培养基质凝胶制备方法，其特征在于，所述去细胞化的肝脏支架的制备方法包括如下步骤：

获取肝脏组织切片，用含EDTA的缓冲液清洗所述组织切片；

将清洗后的所述组织切片放入含有SDS的缓冲液中搅拌以去除肝细胞，获得去细胞化的肝脏支架。

3.根据权利要求2所述的肝细胞特异性培养基质凝胶制备方法，其特征在于，所述组织切片的尺寸为1cm×1cm×0.2cm。

4.根据权利要求2所述的肝细胞特异性培养基质凝胶制备方法，其特征在于，所述缓冲液为PBS缓冲液。

5.根据权利要求2所述的肝细胞特异性培养基质凝胶制备方法，其特征在于，去除肝细胞之后，再以去离子水清洗所述去细胞化的肝脏支架。

6.根据权利要求5所述的肝细胞特异性培养基质凝胶制备方法，其特征在于，还包括对所获得的所述去细胞化的肝脏支架进行显微观察的步骤，以确定肝细胞残余量和所述去细胞化的肝脏支架的显微结构。

7.根据权利要求2所述的肝细胞特异性培养基质凝胶制备方法，其特征在于，所述EDTA的浓度为0.015％～0.025％，所述SDS的浓度为0.4～0.6％。

8.根据权利要求7所述的肝细胞特异性培养基质凝胶制备方法，其特征在于，所述在含有SDS的缓冲液中搅拌的时间为24～48h。

9.根据权利要求1所述的肝细胞特异性培养基质凝胶制备方法，其特征在于，将所述去细胞化的肝脏支架制成干燥粉末的方法具体为，将所述去细胞化的肝脏支架冷冻干燥后粉碎至粉末状。

10.根据权利要求1所述的肝细胞特异性培养基质凝胶制备方法，其特征在于，所述胃蛋白酶的酶活性为2000～3000U/mg。

11.根据权利要求10所述的肝细胞特异性培养基质凝胶制备方法，其特征在于，所述胃蛋白酶溶液配制方法为在每100ml浓度为0.08mol/L～0.12mol/L的HCl溶液中加入80～100mg的胃蛋白酶。

12.根据权利要求10所述的肝细胞特异性培养基质凝胶制备方法，其特征在于，所述酶解的酶解时间至少为48h。

13.根据权利要求1所述的肝细胞特异性培养基质凝胶制备方法，其特征在于，调整所述酶解液的pH值采用浓度为0.08～0.1mol/L的NaOH溶液，在3～5℃下将所述酶解液的pH值调整至7.2～7.6。

14.根据权利要求1所述的肝细胞特异性培养基质凝胶制备方法，其特征在于，所述调整所述酶解液的离子浓度的过程具体为，在温度为3～5℃下采用10倍浓缩浓度的缓冲液调整所述酶解液为等渗溶液，再采用1倍浓度的所述缓冲液稀释所述等渗溶液至预定浓度。

15.根据权利要求1所述的肝细胞特异性培养基质凝胶制备方法，其特征在于，所述孵育的温度为低于40℃。

16.一种肝细胞特异性培养基质凝胶，其特征在于，其包含人源或非人源肝组织的去细胞化的肝脏支架。