[发明专利]一种水溶液中胆红素浓度的定量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种水溶液中胆红素浓度的定量测定方法，属于分析检测技术领域。

背景技术

胆红素是人体内衰老的红细胞中血红素的正常代谢产物，为红褐色的色素体，不溶于水，难溶于醇、醚、易溶于碱。它是临床医学试验中常规检验项目之一，对肝胆疾病及溶血性疾病的诊断有着重要的意义。当胆红素的某一个或几个代谢环节出现障碍时，导致血清总胆红素浓度超过正常水平，出现高胆红素血症(黄疸)，尤其在新生婴儿中，游离胆红素能透过血脑屏障，进一步引起各种组织的细胞尤其是大脑细胞死亡，导致智障、脑瘫甚至是死亡；同时造成肝或胆管功能紊乱，加重肝损伤，尤其是肝炎病人。

胆红素的检测和清除是治疗胆红素相关疾病的重要手段。采用吸附剂进行血液体外灌注是去除胆红素的临床方法。基础研究中，为了解决胆红素不溶于水溶液，通用的方法是先用少量0.1N NaOH溶液溶解，再用磷酸盐缓冲液(pH＝7.2～7.4)或蒸馏水稀释，配制胆红素溶液，然后用于胆红素与吸附剂的相互作用研究。但是该方法的最大的缺点是在碱的作用下，水不溶的胆红素转变成了水溶的胆红素钠。由于胆红素和胆红素钠具有明显不同的化学结构和官能团，导致其与同一种吸附剂的相互作用机制和吸附能力将出现明显差异。同时这种方法所配置的较高浓度胆红素溶液体系不稳定，静置一段时间后，胆红素易从溶液中析出。因此，从这种方法配置的胆红素溶液中难以准确测定胆红素的浓度，也不能真实反映胆红素在吸附剂上的吸附能力，研究结果存在明显偏差。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种水溶液中胆红素浓度的定量测定方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

本发明提供一种水溶液中胆红素浓度的定量测定方法，其包括如下步骤：

S1：制备胆红素溶液，并制作胆红素溶液浓度与吸光度关系的工作曲线；

S2：将吸附剂加入所述胆红素溶液中，在避光条件下进行吸附后，取上层清液测量吸光度，计算吸附剂的对胆红素的吸附率与吸附量；

胆红素不溶于水，醇、醚，易溶于碱，所以人们常用碱性水溶液来配置胆红素溶液。但在碱性水溶液的作用下，水不溶的胆红素转变成了水溶的胆红素钠，由于胆红素和胆红素钠具有明显不同的化学结构和官能团，导致其与吸附剂的相互作用机制和吸附能力将出现明显差异。而胆红素能够溶于二甲亚砜等有机溶剂中，故选用二甲亚砜作为溶剂来溶解胆红素。我们发现二甲亚砜单一溶剂配置出来的胆红素溶液，并不能被壳聚糖或活性炭等吸附剂所吸附，但是加入一定体积的水之后，吸附剂对于胆红素的吸附能力大大提高。而且水所占的体积不同，吸附效果也不同。所以本发明提供一种水溶液中胆红素浓度的定量测定方法具体为：

在避光条件下，将胆红素在有机溶剂中先进行初溶后，再加入有机溶剂和水的混合液进行稀释，得到所述胆红素溶液，并记录胆红素溶液的浓度。

通过一系列实验，我们探索出了步骤S1中所述的用来初溶的有机溶剂的体积优选为2～30mL，所述有机溶剂和水的混合液中，有机溶剂和水的体积比优选为1:1～4:1。

作为优选方案，所述有机溶剂和水的混合液中，有机溶剂和水的体积比最佳为2.5:1。

作为优选方案，步骤S1中所述的有机溶剂为二甲亚砜。

作为优选方案，步骤S2中，吸附是在4～40℃、振荡的条件下进行的。

作为优选方案，所述吸附的最佳温度为37℃。

作为优选方案，步骤S2中所述的吸附剂为壳聚糖或活性炭。

与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：

为了准确检测水溶液中胆红素的浓度以及水溶液中吸附剂对胆红素的吸附能力，如何配置稳定的胆红素水溶液体系是首要问题；本发明的核心内容是找到了一种新的含水溶剂体系，在不改变胆红素的化学结构的前提下溶解胆红素，并测定它与吸附剂的相互作用，从而为水溶液中胆红素浓度的测定提供一种新方法。

附图说明

通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：

图1为本发明实施例1中绘制的胆红素浓度-吸光度工作曲线；

图2为胆红素在二甲亚砜/水溶液中吸光度随时间变化的曲线；

图3为胆红素二甲亚砜/水溶液和胆红素氢氧化钠水溶液分别静置一小时后的表观对比；

图4为胆红素溶于NaOH/D₂O时的¹H-NMR谱图；