[发明专利]鉴定黑色羊肚菌类群中十一个种的交配型方法

权利要求书

1.鉴定黑色羊肚菌类群中十一个物种的交配型的方法，其特征在于该方法包括下述步骤：1)提取待测菌种的菌株总DNA作为PCR扩增模板；2)以引物对MAT1-1L/MAT1-1R进行PCR扩增，获得预期条带的菌株，说明含有MAT1-1交配型；以引物对MAT1-2L/MAT1-2R进行PCR扩增，获得预期条带的菌株，说明含有MAT1-2交配型，3)检测到MAT1-1交配型和MAT1-2交配型其中一种交配型的菌株，说明只含有父本或母本，出菇能力较差或不能出菇；检测到MAT1-1交配型和MAT1-2交配型2条预期的扩增条带的菌株，说明具有父母本两种交配型，具有出菇能力；

所述的MAT1-1L/MAT1-1R特异引物对中，MAT1-1L的核苷酸序列为

5’-TTACCTTACTGGACTGGTTC-3’，MAT1-1R的核苷酸序列为

5’-AATGCAAGTAGGTGTCATTC-3’；

所述的MAT1-2L/MAT1-2R特异引物对中，MAT1-2L的核苷酸序列为

5’-TCCTATGAATGCGTAAGTTC-3’，MAT1-2R的核苷酸序列为

5’-GTATTATCACCAACCGTAGC-3’；

所述黑色羊肚菌类群中的十一个种为中立羊肚菌( M. tridentina) 、光柄半开羊肚菌( M. semilibera) 、头丝羊肚菌( M. exuberans) 、Mel-13、Mel-14、长白羊肚菌( M. eximioides) 、三地羊肚菌( M. eohespera) 、格咱羊肚菌( M. purpurascens) 、Mel-21、督拿羊肚菌( M. dunalii) 和普彻羊肚菌( M. pulchella) 。

2.根据权利要求1所述的鉴定黑色羊肚菌类群中十一个种的交配型方法，其特征在于，所述的鉴定交配型MAT1-1和MAT1-2的PCR扩增体系相同，均包括2×PCR mix 12.5 μL，5 μM的正反向引物各1 μL，DNA模板20 ng，ddH₂O补足至25 μL。

3.根据权利要求2所述的鉴定黑色羊肚菌类群中十一个种的交配型方法，其特征在于，所述的特异引物对MAT1-1L/MAT1-1R鉴定菌株的MAT1-1交配型的PCR扩增程序为：94℃预变性3min；94℃变性1min，50℃退火30sec，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸10min。

4.根据权利要求2所述的鉴定黑色羊肚菌类群中十一个种的交配型方法，其特征在于，所述的特异引物对MAT1-1L/MAT1-1R检测菌株的MAT1-1交配型时，获得大小为0.7kb的唯一条带。

5.根据权利要求2所述的鉴定黑色羊肚菌类群中十一个种的交配型方法，其特征在于，所述的特异引物对MAT1-2L/MAT1-2R鉴定菌株的MAT1-2交配型的PCR扩增程序为：94℃预变性3min；94℃变性1min，50℃退火30sec，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸10min。

6.根据权利要求5所述的鉴定黑色羊肚菌类群中十一个种的交配型方法，其特征在于，所述的特异引物对MAT1-2L/MAT1-2R，检测菌株MAT1-2交配型时，获得大小为0.4kb的唯一条带。