[发明专利]一种ASE‑HPLC法测定紫苏子中迷迭香含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于化学检测领域，尤其是一种ASE-HPLC法测定紫苏子中含量的方法。

背景技术

2015年药典记录了提取紫苏子中迷迭香酸的方法：取本品粉末(过二号筛)约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇50ml，密塞，称定重量，加热回流2小时，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇勻，滤过，取续滤液，即得。

其液相色谱的参数为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(75：25)为流动相；检测波长为289nm。理论板数按迷迭香酸峰计算应不低于3000。

药典的方法操作过程复杂，对操作人员的操作技能要求高。

发明内容

针对上述不足，本发明旨在提供一种ASE法对样品进行萃取与HPLC法对样品中迷迭香酸的含量进行测定的方法进行结合，从而达到操作简单，萃取时间短，萃取彻底且检测精度高的方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC法测定紫苏子中迷迭香酸含量的方法，依次包括下述步骤：

步骤1：采用ASE法用甲醇对粉碎后的紫苏子样品进行萃取，并收集甲醇萃取液；

步骤2：采用HPLC法对甲醇萃取液中的迷迭香酸进行含量测定。

进一步的，所述的步骤1包括下述子步骤：

步骤S1：将样品粉碎，过二号筛，取0.5g与0.3g硅藻土混合；

步骤S2：将步骤1所得的混合物装于放有滤膜的5ml ASE萃取池中，并加硅藻土至与池口平行；

步骤S3：用50ml甲醇萃取，并在萃取结束后用甲醇定容至50ml，得粗萃取液；

步骤S4：将粗提取液在15000r/min下离心5min，取上清液，得甲醇萃取液。

进一步的，步骤S3所述的萃取参数为：萃取溶剂为80％甲醇，萃取温度为100℃，萃取时间为5min，萃取次数为3次，冲洗体积为100％，吹扫时间为100s。

进一步的，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：色谱柱为ASE Excel 2C18-AR，2.1*75mm，3μm；流速为0.3mL/min；流动相为甲醇-0.1％甲酸；检测波长为330nm。

进一步的，所述的流动相的甲醇-0.1％甲酸的体积比为40:60。

进一步的，所述的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。

进一步的，理论板数按迷迭香酸峰计算应不低于3000。

进一步的，所述的ASE法所采用的仪器为美国DIONEX公司的ASE350快速溶剂萃取仪；HPLC法所采用的仪器为Thermo U3000UHPLC液相色谱仪。

本发明与传统方法相比，具有以下优点：

1.本发明提高了温度降低溶剂的黏度，减少了溶剂进入样品基体的阻止，增加了溶剂进入样品基体的扩散，降低溶剂和样品基体之间的表面张力，使溶剂溶解待测物的容量增加；

2.由于液体对溶质的溶解能力远大于气体对溶质的溶解能力，故萃取液体的沸点随压力升高而提高，从而使溶剂在高温高压下仍保持在液态；

3.采用本发明所述的HPLC法对本发明所述的ASE萃取的甲醇萃取液，得迷迭香酸在2.717～54.34ng围内呈良好的线性关系；

4.本发明通过实验表明本发明所述的ASE提取方法重复性良好；

5.本发明采用4因素3水平正交试验考察了对提取效率影响较大的4个因素：萃取温度、静态萃取时间、循环次数，通过实验，并由极差分析可以看出，提取溶剂对迷迭香酸的含量影响最大，其次是萃取温度、循环次数和静态萃取时间；

最终确定较佳ASE参数为萃取温度100℃，静态萃取时间5min，循环提取3次。

附图说明

图1为柚皮苷以浓度(ng)-峰面积进行线性回归图；

图2为药典方法测定迷迭香酸对照品的色谱图；

图3为药典方法测定紫苏子中柚皮苷含量的色谱图；

图4为ASE-HPLC法测定迷迭香酸对照品的色谱图；

图5为ASE-HPLC法测定紫苏子中柚皮苷含量的色谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明的权利要求书做进一步说明，但不构成对本发明的任何限制，任何对本发明做有限次修改所得的技术方案，仍然属于本发明所要保护的范围。

1.仪器设备及试剂

1.1仪器：