[发明专利]一种促进农业废弃物快速腐解的复合菌剂及其制作方法

权利要求书

1.一种米曲霉、酿酒酵母、黑曲霉AS3.316、枯草芽孢杆菌ACCCNo.03189和耐盐乳酸菌CGMCC 3792在制备促进农业废弃物快速腐解的复合菌剂中的应用，其特征在于，所述复合菌剂由以下重量份的原料制备而成：米曲霉培养物40-60份、酵母菌培养物10-20份、黑曲霉培养物10-20份、枯草芽孢杆菌培养物10-20份和乳酸菌培养物1-2份，所述米曲霉为米曲霉沪酿3.042或米曲霉沪酿1.08；

所述米曲霉培养物是将米曲霉接种于熟黄豆和小麦秸秆粉的混合物中，发酵2-3d而得；

所述酵母菌培养物是将酵母菌接种于液体麦芽汁培养基中，培养2-3d而得；

所述黑曲霉培养物是将黑曲霉接种于小麦秸秆粉和豆粕的混合物中，发酵2-3d而得；

所述枯草芽孢杆菌培养物是将枯草芽孢杆菌接种于小麦秸秆粉和碳粉的混合物中，发酵18-24h而得；

所述乳酸菌培养物是将乳酸菌接种于小麦秸秆粉、碳粉和氯化钠的混合物中，培养1-2d而得。

2.根据权利要求1所述的米曲霉、酿酒酵母、黑曲霉AS3.316、枯草芽孢杆菌ACCCNo.03189和耐盐乳酸菌CGMCC 3792在制备促进农业废弃物快速腐解的复合菌剂中的应用，其特征在于，由以下重量份的原料制备而成：米曲霉培养物50份、酵母菌培养物15份、黑曲霉培养物15份、枯草芽孢杆菌培养物15份和乳酸菌培养物1份。

3.根据权利要求1所述的米曲霉、酿酒酵母、黑曲霉AS3.316、枯草芽孢杆菌ACCCNo.03189和耐盐乳酸菌CGMCC 3792在制备促进农业废弃物快速腐解的复合菌剂中的应用，其特征在于，由以下重量份的原料制备而成：米曲霉培养物40份、酵母菌培养物20份、黑曲霉培养物20份、枯草芽孢杆菌培养物10份和乳酸菌培养物2份。

4.根据权利要求1-3任一项所述的米曲霉、酿酒酵母、黑曲霉AS3.316、枯草芽孢杆菌ACCCNo.03189和耐盐乳酸菌CGMCC 3792在制备促进农业废弃物快速腐解的复合菌剂中的应用，其特征在于，所述复合菌剂中的有效活菌数为10⁸个/克。

5.一种根据权利要求1所述的米曲霉、酿酒酵母、黑曲霉AS3.316、枯草芽孢杆菌ACCCNo.03189和耐盐乳酸菌CGMCC 3792在制备促进农业废弃物快速腐解的复合菌剂中的应用，其特征在于，所述复合菌剂按照以下步骤制备：

步骤1，制备米曲霉培养物

步骤1.1，活化米曲霉菌种，并用无菌水洗脱米曲霉孢子，得到米曲霉孢子悬浮液；

步骤1.2，将黄豆于水中浸泡4-6h，沥干水分，然后蒸熟，冷却至30-40℃，得到熟黄豆；将小麦秸秆磨成粉，过60目筛，得到小麦秸秆粉；然后将熟黄豆和小麦秸秆粉按照1:2的质量比例混合均匀，得到米曲霉培养基质；

步骤1.3，向米曲霉培养基质中接种米曲霉孢子悬浮液，其中每千克米曲霉培养基质接种米曲霉孢子悬浮液5-10ml，混合均匀，然后于28-32℃发酵培养2-3d，得到米曲霉培养物；

步骤2，制备酵母菌培养物

将酵母菌接种于液体麦芽汁培养基中，18-25℃发酵培养2-3d，得到酵母菌培养物；

步骤3，制备黑曲霉培养物

步骤3.1，活化黑曲霉菌种，并用无菌水洗脱黑曲霉孢子，得到黑曲霉孢子悬浮液；

步骤3.2，将豆粕于水中浸泡2-3h，沥干水分，然后蒸熟，冷却至30-40℃，得到熟豆粕；将小麦秸秆磨成粉，过60目筛，得到小麦秸秆粉；然后将熟豆粕和小麦秸秆粉按照1:2的质量比例混合均匀，得到黑曲霉培养基质；

步骤3.3，向黑曲霉培养基质中接种黑曲霉孢子悬浮液，其中每千克黑曲霉培养基质接种黑曲霉孢子悬浮液5-10ml，混合均匀，然后于28-32℃发酵培养2-3d，得到黑曲霉培养物；

步骤4，制备枯草芽孢杆菌培养物

步骤4.1，活化枯草芽孢杆菌菌种，并将活化的枯草芽孢杆菌接种于LB液体培养基中，36-38℃条件下培养20h，得到枯草芽孢杆菌种子液；

步骤4.2，将小麦秸秆磨成粉，过60目筛，得到小麦秸秆粉；然后将小麦秸秆粉和80目的碳粉按照10:1的质量比例混合均匀，得到枯草芽孢杆菌培养基质；

步骤4.3，向枯草芽孢杆菌培养基质中接种枯草芽孢杆菌种子液，其中每千克枯草芽孢杆菌培养基质接种枯草芽孢杆菌种子液5-10ml，接着加入相当于枯草芽孢杆菌培养基质30%质量的无菌水，混合均匀，然后于35-38℃发酵培养2-3d，得到枯草芽孢杆菌培养物；

步骤5，制备乳酸菌培养物

步骤5.1，活化乳酸菌菌种，并将活化的乳酸菌接种于MRS液体培养基中，28-30℃条件下培养2-3d，得到乳酸菌种子液；

步骤5.2，将小麦秸秆磨成粉，过60目筛，得到小麦秸秆粉；然后将小麦秸秆粉、氯化钠和80目的碳粉按照10:0.4:1的质量比例混合均匀，得到乳酸菌培养基质；

步骤5.3，向乳酸菌培养基质中接种乳酸菌种子液，其中每千克乳酸菌培养基质接种乳酸菌种子液5-10ml，接着加入相当于乳酸菌培养基质30%质量的无菌水，混合均匀，然后于28-30℃发酵培养2-3d，得到乳酸菌培养物；

步骤6，按以下重量份称取各组分：米曲霉培养物40-60份、酵母菌培养物10-20份、黑曲霉培养物10-20份、枯草芽孢杆菌培养物10-20份和乳酸菌培养物1-2份，充分混合均匀，于28-30℃培养24h，得到湿菌剂，最后于35-40℃条件下干燥至湿菌剂的水分含量低于10%，得到促进农业废弃物快速腐解的复合菌剂，0-4℃保存备用。