[发明专利]抗微囊藻毒素抗体的杂交瘤细胞株及其所分泌的单克隆抗体

说明书

本发明公开了一种抗微囊藻毒素抗体的杂交瘤细胞株及其所分泌的单克隆抗体，所述细胞株的保藏号为CGMCC NO.13802。用BSA与微囊藻毒素‑LR偶联后的微囊藻毒素‑LR‑BSA免疫BALB/c小鼠，取其脾脏与Sp2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合，用HAT培养基进行选择性培养。用OVA与微囊藻毒素‑LR偶联后的抗原微囊藻毒素‑LR‑OVA作为酶联免疫吸附分析的包被原，用ELISA方法，对杂交瘤细胞培养上清中的抗体进行检测，筛选获得稳定分泌抗微囊藻毒素抗体的杂交瘤细胞株6G7。本发明单克隆抗体可特异性识别MC‑LR，对MC‑LR的50％抑制浓度IC50为0.26ng/mL。可用于微囊藻毒素的生物活性的研究、免疫学检测方法建立及其样品前处理试剂的制备。

技术领域

本发明属于生物技术及细胞工程领域，尤其涉及一种分泌抗微囊藻毒素抗体的杂交瘤细胞株及其所分泌的单克隆抗体。

背景技术

微囊藻毒素(Microcystin，MC)是水体中蓝藻爆发性繁殖产生的二级毒性代谢物，MC为肝毒素，能在贻贝和扇贝的消化腺内积累并沿食物链进入到鱼、鸟、哺乳动物和人等高级营养生物体内，引起中毒甚至死亡。MC是一类具有生物活性的环状七肽化合物，由于多肽中两种可变氨基酸组成的不同，具有60余种异构体。其中存在最普遍、含量最多的是MC-LR，MC-RR,MC-YR这3种微囊藻毒素(L、R、Y分别代表亮氨酸、精氨酸和酪氨酸)。MC的毒性和其结构相关，Adda是表达MC毒性的必须基团，研究表明，MC-LR的急性毒性最强，MC-YR次之，MC-RR最弱，以上是分布最广泛的肝毒素。微囊藻毒素主要由淡水藻铜绿微囊藻(Microcystisaeruginosa)产生，具有相当的稳定性，它能够强烈抑制蛋白磷酸酶的活性，还有强烈的肝脏癌促进剂。

2001年卫生部卫法监发[2001]161号文件附件和地表水环境质量标准[GB 3838-2002]都有微囊藻毒素的检测项目，世界卫生组织(WHO)在《饮用水卫生基准》中制定的微囊藻毒素的指标为1μg/L。

目前水体中藻毒素的检测大多采用HPLC-MS或是LC-MS等检测方法，这类检测技术往往操作复杂、耗时长、价格较高、精度难以满足要求，限制了常规检测的次数，而免疫检测技术在藻毒素的检测领域呈现了较好的应用前景，受到国内外研究人员的关注。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种抗微囊藻毒素抗体的杂交瘤细胞株及其所分泌的单克隆抗体。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案：一种抗微囊藻毒素抗体的杂交瘤细胞株,所述细胞株的保藏号为CGMCC NO.13802。

上述杂交瘤细胞株分泌的抗微囊藻毒素单克隆抗体。

所述单克隆抗体为IgG2b类抗体，抗体轻链为κ亚型。

本发明的有益效果是：本发明的抗原制备方法简便可行,制备的完全抗原免疫BALB/c小鼠产生了较好的免疫应答；本发明提供的微囊藻毒素单克隆抗体特异性强，制备方法简单，用于微囊藻毒素的研究和微囊藻毒素免疫学检测方法的建立；获得稳定分泌微囊藻毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株6G7，测得6G7腹水ELISA效价为6.05×10⁵。经鉴定该单克隆抗体为IgG2b类抗体，抗体轻链为κ亚型。

附图说明

图1纯化后单抗的电泳图(1道为微囊藻毒素抗体)。

图2微囊藻毒素半抑制浓度曲线。

具体实施方式

抗微囊藻毒素抗体的杂交瘤细胞株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC NO.13802，保藏日：2017-02-23，分类命名：鼠源杂交瘤细胞株。