[发明专利]葡聚糖接枝改性的白果蛋白制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及医药、食品领域，具体涉及一种葡聚糖接枝改性的白果蛋白的制备方法及其在抗衰老产品中的应用。

背景技术

衰老又称老化，是指生物体在正常状况下发育成熟后，随着年龄的增加，机体在退化时期生理功能下降和紊乱的综合表现，是不可逆的生命过程。随着社会的发展、医学的进步和人民生活水平的不断提高，人类的平均寿命也将不断延长，但也会出现相应的社会老龄化问题以及心血管病、脑血管病、癌症、关节炎等老年性疾病发病率上升的问题。2000年的老年人口的比例为6.9％，预计到2050年老龄人口的比例将增加到19.3％，每年因老年性疾病引起的死亡率也逐年上升。

银杏(Ginkgo biloba L.)是裸子植物门银杏纲银杏属植物，素有国家“活化石”之称。白果是银杏种实去掉肉质外种皮后的种核部分。已有研究表明，银杏具有较好的抗衰老作用。白果因其多糖、蛋白质和脂肪等营养物质丰富而为日本人尊为“圣果”、“长寿果”，被当作养生延年的上品。白果因其品味甘美、药食俱佳，自古以来就被作为老幼皆宜的保健食品和款待国宾上客的特制佳肴。白果中含有8.7％～13.4％的蛋白质(不同品种有差异)，其氨基酸组成丰富、合理，属优质蛋白。有研究显示，白果药食兼备的特性及其保健功能与其蛋白质成分有着密切联系。

蛋白质-糖的接枝反应(美拉德反应)主要是基于蛋白质分子中氨基酸侧链的自由氨基α-或ε-氨基和糖分子还原末端的羰基之间的羰氨反应。蛋白质与糖的接枝反应，不需要任何化学试剂作为催化剂，仅加热就可使该反应自发地进行。研究表明，蛋白质-糖接枝物是一种性质优良的多功能复合物。它们是由蛋白质和糖两种天然生物分子在无任何化学催化剂参与下经由接枝反应制得，符合现代绿色环保的概念，有着广泛的应用前景。蛋白质一般对热，水解作用很不稳定，但对碳水化合物或生物多聚物的交联能变得稳定，也被赋予一些新的特性。蛋白和糖共价复合的糖基化产物具有较良好的功能特性。与蛋白质和糖非共价结合的糖基化产物相比较，其对外部条件具有较高的稳定性，而且不受热或pH值的变化而被破坏。由于接枝产物中的糖链存在，多羟基的亲水特性可以使整个蛋白分子的溶解性明显提高。而且蛋白质和糖的接枝物还具有良好的乳化特性、气泡性等功能性质。近年来，还有资料显示蛋白质－糖接枝物与未糖基化接枝的蛋白质相比，在抗氧化、抗衰老、抑菌性、自由基清除能力和抗原性等方面有相应的改善。

发明内容

本发明的目的是提供一种葡聚糖接枝改性的白果蛋白的制备方法，该方法接枝产物得率高、简便且接枝产物具有较好的抗氧化、抗衰老作用。

为了实现本发明目的，本发明利用葡聚糖对白果蛋白进行接枝改性，从而使改性蛋白的抗氧化活性得到显著改善，具体方法如下：

(1)取白果粉碎，得白果粉，加6～12倍量的pH为7.0-9.0的PBS溶液(磷酸盐缓冲溶液)搅拌，4℃冰箱放置一夜，离心(优选8000g×10min，4℃)收集上清液，沉淀再用6～12倍量的pH为7.0-9.0的PBS搅拌均匀，放置一夜，离心(优选8000g×10min，4℃)，合并两次的上清液，缓慢加入硫酸铵体积浓度至50％-80％为止，4℃放置过夜，离心(优选8000g×10min，4℃)，收集沉淀，将沉淀用适量的水溶解，装入分子截留量为1000Da的透析袋中于冰浴上透析，待除去盐后，透析液冷冻干燥得白果蛋白，-20℃冷冻保存，待用。

(2)将步骤(1)白果蛋白与葡聚糖混合，然后加磷酸缓冲盐溶解，得混合液a；

(3)调混合液a的pH值，然后加水至蛋白终浓度为1-5mg/mL，得混合液b；

(4)将混合液b加热反应，得白果蛋白-葡聚糖接枝反应液；

(5)待上述反应液冷却至室温，调节pH值(优选为7.0)，然后离心，收集上清液经浓缩、干燥后即得葡聚糖接枝改性的白果蛋白产品。

前述的方法，步骤(1)所述白果蛋白为白果分离蛋白，蛋白含量>60％，所述葡聚糖为葡聚糖，葡聚糖为分析纯。

前述的方法，步骤(2)中所述葡聚糖为分子量为2-10万，白果蛋白与葡聚糖的重量比为2：1、1：1、1：2或1：10。特别优选白果蛋白与葡聚糖的重量比为1：1。

前述的方法，步骤(3)中调混合液a的pH值为6、7、8、9或10，加水后蛋白终浓度为1、2、3、4或5mg/mL；特别优选蛋白终浓度为4mg/mL。