[发明专利]表达天维菌素B的重组微生物、制备方法及其用途有效

专利信息
申请号: 201710216023.X 申请日: 2017-04-01
公开(公告)号: CN108660101B 公开(公告)日: 2021-07-09
发明(设计)人: 黄隽;余贞;周亚娜;林甲壇;周小华;李美红 申请(专利权)人: 浙江海正药业股份有限公司
主分类号: C12N1/21 分类号: C12N1/21;C12N15/76;C12P19/62;C12R1/465
代理公司: 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 代理人: 彭鲲鹏
地址: 318000 浙*** 国省代码: 浙江;33
权利要求书: 查看更多 说明书: 查看更多
摘要:
搜索关键词: 表达 菌素 重组 微生物 制备 方法 及其 用途
【说明书】:

本发明涉及一种单组分天维菌素B基因工程菌及其制备方法。该基因工程菌是在天维菌素产生菌Streptomyces avermitilis MA220的基因组中将milA1基因的AT0结构域置换成红霉素合成基因簇的AT0结构域而获得。所述天维菌素B工程菌发酵后,只产生单一组分的天维菌素B。

技术领域

本发明属于基因工程及微生物发酵领域,具体涉及表达天维菌素B的重组微生物及其制备方法,以及利用所述重组微生物生产天维菌素B的方法。

背景技术

天维菌素类化合物是从阿维菌素产生菌除虫链霉菌MA-4680出发进行基因改造,结合阿维菌素、伊维菌素和米尔贝霉素的化学结构和各自生物学特性(抗虫活性、抗虫谱以及生物毒性)上的优势,设计得到的一组十六元大环内酯类新化合物(Jun Huang,An-LiangChen,Hui Zhang,et al.Gene Replacement for the Generation of Designed NovelAvermectin Derivatives with Enhanced Acaricidal and NematicidalActivities.Applied and Environmental Microbiology,August 2015,Volume 81,Number 16.)。该类化合物具有广谱、高效、无残留毒性,对环境友好等特征。初步的活性试验结果也表明,天维菌素对多种常见害虫,如红蜘蛛、烟粉虱、稻飞虱、蓟马、猪鞭虫等等的抗虫活性要远远高于阿维菌素、伊维菌素、米尔贝霉素、甲维盐等主流农药和兽药,而毒性则低于目前市面上常用的农药和兽药,具有进一步开发成新型高效农药和兽药的潜力。

天维菌素类化合物一般包括天维菌素A(TEVA)和天维菌素B(TEVB),具体结构通式如下:

R为CH3时为天维菌素A;R为C2H5时为天维菌素B。

专利PCT/CN2015/073960公开了一种天维菌素类化合物的制备方法,其通过失活除虫链霉菌MA4680中的aveD基因,并且用功能性milA1基因替换链霉菌基因组中的aveA1基因从而获得了一种可以生产天维菌素的基因工程菌MA220。但是在其发酵代谢产物中,天维菌素B的含量较低,根据其公开的技术内容来看,天维菌素A和天维菌素B的比例(质量比)为7:3、8:2或9:1。而天维菌素B组分抗朱砂叶螨、小菜蛾、棉铃虫,松材线虫病,水稻螟虫等农林作物害虫活性要优于组分A,因此有必要开发一种可生产高含量天维菌素B的工程菌种。

发明内容

本发明的第一方面是提供一种表达天维菌素B的重组链霉菌,其 中所述重组链霉菌中的milA1AT0结构域基因编码序列置换成红色糖多孢菌(Saccharopolysporaerythraea NRRL23338)eryA1中的AT0结构域基因序列。

在一个实施方案中,本发明的重组链霉菌是将除虫链霉菌MA220中的milA1AT0结构域基因编码序列置换成红色糖多孢菌(Saccharopolyspora erythraea NRRL23338)eryA1中的AT0结构域基因序列。所述除虫链霉菌MA220可通过专利PCT/CN2015/073960公开的相关方法进行制备。

在另一个实施方案中,所述重组链霉菌只表达天维菌素B而不表达天维菌素A。

在一个具体实施方案中,所述milA1AT0结构域基因编码序列如SEQ ID NO:1所示;所述eryA1AT0结构域基因编码序列如SEQ IDNO:3所示;所述置换是通过将DNA片段S导入到除虫链霉菌MA220中,使DNA片段S与出发菌MA220中的milA1基因发生同源重组而完成。

本发明的第二方面是提供本发明的重组链霉菌用于生产天维菌素B的用途。

下载完整专利技术内容需要扣除积分,VIP会员可以免费下载。

该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息,商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于浙江海正药业股份有限公司,未经浙江海正药业股份有限公司许可,擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作,请联系【客服

本文链接:http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201710216023.X/2.html,转载请声明来源钻瓜专利网。

×

专利文献下载

说明:

1、专利原文基于中国国家知识产权局专利说明书;

2、支持发明专利 、实用新型专利、外观设计专利(升级中);

3、专利数据每周两次同步更新,支持Adobe PDF格式;

4、内容包括专利技术的结构示意图流程工艺图技术构造图

5、已全新升级为极速版,下载速度显著提升!欢迎使用!

请您登陆后,进行下载,点击【登陆】 【注册】

关于我们 寻求报道 投稿须知 广告合作 版权声明 网站地图 友情链接 企业标识 联系我们

钻瓜专利网在线咨询

周一至周五 9:00-18:00

咨询在线客服咨询在线客服
tel code