[发明专利]表达天维菌素B的重组微生物、制备方法及其用途有效
申请号: | 201710216023.X | 申请日: | 2017-04-01 |
公开(公告)号: | CN108660101B | 公开(公告)日: | 2021-07-09 |
发明(设计)人: | 黄隽;余贞;周亚娜;林甲壇;周小华;李美红 | 申请(专利权)人: | 浙江海正药业股份有限公司 |
主分类号: | C12N1/21 | 分类号: | C12N1/21;C12N15/76;C12P19/62;C12R1/465 |
代理公司: | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人: | 彭鲲鹏 |
地址: | 318000 浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 表达 菌素 重组 微生物 制备 方法 及其 用途 | ||
本发明涉及一种单组分天维菌素B基因工程菌及其制备方法。该基因工程菌是在天维菌素产生菌Streptomyces avermitilis MA220的基因组中将milA1基因的AT0结构域置换成红霉素合成基因簇的AT0结构域而获得。所述天维菌素B工程菌发酵后,只产生单一组分的天维菌素B。
技术领域
本发明属于基因工程及微生物发酵领域,具体涉及表达天维菌素B的重组微生物及其制备方法,以及利用所述重组微生物生产天维菌素B的方法。
背景技术
天维菌素类化合物是从阿维菌素产生菌除虫链霉菌MA-4680出发进行基因改造,结合阿维菌素、伊维菌素和米尔贝霉素的化学结构和各自生物学特性(抗虫活性、抗虫谱以及生物毒性)上的优势,设计得到的一组十六元大环内酯类新化合物(Jun Huang,An-LiangChen,Hui Zhang,et al.Gene Replacement for the Generation of Designed NovelAvermectin Derivatives with Enhanced Acaricidal and NematicidalActivities.Applied and Environmental Microbiology,August 2015,Volume 81,Number 16.)。该类化合物具有广谱、高效、无残留毒性,对环境友好等特征。初步的活性试验结果也表明,天维菌素对多种常见害虫,如红蜘蛛、烟粉虱、稻飞虱、蓟马、猪鞭虫等等的抗虫活性要远远高于阿维菌素、伊维菌素、米尔贝霉素、甲维盐等主流农药和兽药,而毒性则低于目前市面上常用的农药和兽药,具有进一步开发成新型高效农药和兽药的潜力。
天维菌素类化合物一般包括天维菌素A(TEVA)和天维菌素B(TEVB),具体结构通式如下:
R为CH3时为天维菌素A;R为C2H5时为天维菌素B。
专利PCT/CN2015/073960公开了一种天维菌素类化合物的制备方法,其通过失活除虫链霉菌MA4680中的aveD基因,并且用功能性milA1基因替换链霉菌基因组中的aveA1基因从而获得了一种可以生产天维菌素的基因工程菌MA220。但是在其发酵代谢产物中,天维菌素B的含量较低,根据其公开的技术内容来看,天维菌素A和天维菌素B的比例(质量比)为7:3、8:2或9:1。而天维菌素B组分抗朱砂叶螨、小菜蛾、棉铃虫,松材线虫病,水稻螟虫等农林作物害虫活性要优于组分A,因此有必要开发一种可生产高含量天维菌素B的工程菌种。
发明内容
本发明的第一方面是提供一种表达天维菌素B的重组链霉菌,其 中所述重组链霉菌中的milA1AT0结构域基因编码序列置换成红色糖多孢菌(Saccharopolysporaerythraea NRRL23338)eryA1中的AT0结构域基因序列。
在一个实施方案中,本发明的重组链霉菌是将除虫链霉菌MA220中的milA1AT0结构域基因编码序列置换成红色糖多孢菌(Saccharopolyspora erythraea NRRL23338)eryA1中的AT0结构域基因序列。所述除虫链霉菌MA220可通过专利PCT/CN2015/073960公开的相关方法进行制备。
在另一个实施方案中,所述重组链霉菌只表达天维菌素B而不表达天维菌素A。
在一个具体实施方案中,所述milA1AT0结构域基因编码序列如SEQ ID NO:1所示;所述eryA1AT0结构域基因编码序列如SEQ IDNO:3所示;所述置换是通过将DNA片段S导入到除虫链霉菌MA220中,使DNA片段S与出发菌MA220中的milA1基因发生同源重组而完成。
本发明的第二方面是提供本发明的重组链霉菌用于生产天维菌素B的用途。
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