[发明专利]一种预示和鉴定甜瓜橙色果肉性状的分子标记及其引物与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种预示和鉴定甜瓜橙色果肉性状的分子标记及其引物与应用，属于甜瓜分子标记辅助选择育种技术领域。

背景技术

分子标记辅助选择(molecular marker assisted selection，MAS)是随着现代分子生物学技术的迅速发展而产生的新技术，它可以从分子水平上快速准确地分析个体的遗传组成，从而实现对基因型的直接选择，进行分子育种。分子标记辅助选择育种就是利用与作物重要性状连锁的DNA标记或功能基因来改良植物品种的现代分子育种技术，因此，分子标记辅助选择成功的关键在于所获得的分子标记是否与待分析的性状相连锁以及是否在同一物种的不同材料间具有通用性。

甜瓜育种目标涉及对某些经济性状的改进，并且要兼顾到生产者与消费者两方面的需要。当今世界甜瓜育种的主要目标是抗病、品质和特色育种。甜瓜果肉颜色是甜瓜外观品质构成的一项重要指标，尤其当今甜瓜常作为高档水果进入餐桌，使具有艳丽色彩的品种备受青睐。甜瓜果肉的营养成分丰富，除可溶性固形物(13％-15％)居瓜类含糖量之首外，还含有多种人体必需的矿物质(钙、磷、铁等)以及β-胡萝卜素、叶黄素、玉米黄质、堇菜黄质等多种色素，甜瓜果肉所含的类胡萝卜素种类及其相对含量的差别造成了果肉颜色的多样性。同时，甜瓜果肉中的色素也具有对人体有益的生理功能，有研究表明，β-胡萝卜素可以消除自由基对机体的损伤，具有抗氧化作用,对于预防癌症有重要的作用。此外，β-胡萝卜素可在人体内转化成维生素A，维生素A是维持实力和皮肤正常状态所必须的物质，缺乏则会导致干眼病和夜盲症(JA Olson.Carotenoids and human health,1999,55(3):207-216；H Nishino,M Murakoshi,et al.Cancer prevention by carotenoids,2015,483(12):165-168)。因此通过分子标记辅助选择的方法高效的选育具有不同果肉颜色的甜瓜品种是当前甜瓜育种工作的重要部分之一。

随着DNA分子标记技术的快速发展，利用与植物相关基因紧密连锁的分子标记进行辅助选择，可以极大的提高对目标性状筛选的效率。近年来，随着高通量测序技术的迅猛发展，通过测序技术获得的甜瓜基因组数据为甜瓜主要性状的基因定位及大量分子标记的开发提供了新的途径。CAPS分子标记是以酶切位点单碱基突变产生多态性的分子标记，以其分布范围广泛、变异稳定成为基因定位及分子生物学研究的新一代标记，CAPS标记操作简便，结果易于观测且在相同物种间具有普遍适用性。

到目前为止，甜瓜育种中主要应用的分子标记为RFLP、SSR、AFLP、RAPD等，CAPS分子标记运用较少。与RFLP相比，CAPS分子标记具有操作简便，多态性高的优点；CAPS分子标记比RAPD的稳定性、可靠性、重复性更好；相对于AFLP来说，CAPS分子标记工作量小、易统计条带；相较于SSR来说，CAPS标记引物设计更为容易。另外，CAPS分子标记对DNA浓度与纯度要求较低，降低DNA提取的工作难度。由此可见，CAPS标记具有巨大的开发前景。本分子标记的发明对于丰富甜瓜育种分子标记的多样性具有重要意义。

发明内容

为提供一种可以用于预示和鉴定甜瓜橙色果肉性状的分子标记，本发明提供了一种预示和鉴定甜瓜橙色果肉性状的分子标记及其引物与应用，采用的技术方案如下：

本发明的目的在于提供一种预示和鉴定甜瓜橙色果肉性状的分子标记HF，所述分子标记HF如SEQ ID NO.1所示，其中SEQ ID NO.1所示核苷酸序列第640位碱基M为G或A，SEQ ID NO.1所示核苷酸序列第640位碱基m为G，则鉴定为橙色果肉的甜瓜，SEQ ID NO.1所示核苷酸序列第640位碱基m为A，则鉴定为非橙色果肉的甜瓜。

本发明还提供所述分子标记HF在甜瓜分子标记辅助育种、甜瓜果肉性状辅助鉴定和辅助育种、甜瓜果肉性状辅助鉴定、甜瓜果肉性状筛选中的应用。

本发明还提供一种用于PCR检测所述分子标记HF的引物对，包括核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的上游引物HF-F和核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的下游引物HF-R。

本发明还提供所述分子标记HF的引物对在甜瓜分子标记辅助育种、甜瓜果肉性状辅助鉴定和辅助育种、甜瓜果肉性状筛选中的应用。

本发明还提供一种鉴定甜瓜橙色果肉性状的方法，包括以下步骤：

1)提取待检测甜瓜样品的基因组DNA；