[发明专利]一种大豆异黄酮分离纯化用大孔吸附树脂的制备方法

说明书

本发明公开了一种大豆异黄酮分离纯化用大孔吸附树脂的制备方法，涉及生物医药纯化技术领域，制备方法包括如下步骤：(1)大孔吸附树脂的制备，(2)大孔吸附树脂的预处理，(3)大孔吸附树脂的改性。本发明所制大孔吸附树脂对大豆异黄酮的吸附量达到17mg/g以上，经60％甲醇溶液冲洗后能实现大豆异黄酮的高效解吸，解吸率达到98.5％以上，所制大豆异黄酮的纯度达到60％以上，因此该大孔吸附树脂适用于大豆异黄酮的高效分离。

技术领域：

本发明涉及生物医药纯化技术领域，具体涉及一种大豆异黄酮分离纯化用大孔吸附树脂的制备方法。

背景技术：

天然存在的大豆异黄酮共有12种，分为大豆苷、染料木苷和黄豆黄素苷3大类。大豆异黄酮具有抗氧化、预防癌症、增强免疫力及改善动物生产性能等功能，已被广泛应用于生物、饲料、医药和食品保健等领域中。研究发现，只有游离型的苷元才具有生物学活性，需经酶解或酸水解糖苷转化成游离型的苷元才能被动物或人体所吸收。目前，提高大豆异黄酮中苷元含量的方法主要有浸提法、物理辅助法、高压湿法和超滤法等，但这些方法存在工艺较复杂、成本较高和有机溶剂残留量高等缺点，不适于批量化制备。

大孔吸附树脂法是近年来使用广泛的一种纯化方法，相对其他纯化方法具有选择性好、无毒和无污染等优点，但目前使用的大孔吸附树脂的吸附量较低，且解吸时需要大量有机溶剂冲洗，即使这些有机溶剂能被回收再利用，也需要消耗大量能量来实现。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题在于提供一种吸附量高、解吸容易且苷元含量高的大豆异黄酮分离纯化用大孔吸附树脂的制备方法。

本发明所要解决的技术问题采用以下的技术方案来实现：

一种大豆异黄酮分离纯化用大孔吸附树脂的制备方法，其制备方法包括如下步骤：

(1)大孔吸附树脂的制备：向水中按比例加入苯乙烯、氢化松香丙烯酸丙三醇酯、甲基丙烯酸羟乙酯、纳米致孔剂和引发剂，充分混合后于超声频率40kHz、输出功率200W下超声处理15min，再于微波频率2450MHz、输出功率700W下微波处理10min，并于0-5℃环境中静置30min，混合均匀后继续微波处理10min，然后于-5-0℃环境中静置15min，混合均匀后再次微波处理10min，所得混合液以5℃/min的降温速度降温至0-5℃保温混合1h，随后将混合液固液分离，所得固相用35-40℃温水水洗三次得到白球，最后将白球于60-65℃下真空干燥，即得大孔吸附树脂；

(2)大孔吸附树脂的预处理：向上述所制大孔吸附树脂中加入泊洛沙姆、N-羟甲基丙烯酰胺和水解聚马来酸酐，并以5℃/min的升温速度升温至65-70℃保温混合30min，再向所得混合物中加入3倍重量30-35℃水，继续以5℃/min的升温速度升温至回流状态保温混合15min，然后自然冷却至室温，过滤，所得树脂球体水洗三次，最后于60-65℃下真空干燥；

(3)大孔吸附树脂的改性：向异氰尿酸三缩水甘油酯中加入纳米二氧化钛和衣康酸酐，以5℃/min的升温速度升温至115-120℃保温混合15min，再加入经预处理后的大孔吸附树脂，继续在115-120℃保温混合30min，待自然冷却至室温后水洗三次，最后经所得树脂球体于60-65℃下真空干燥。

所述步骤(1)中水、苯乙烯、氢化松香丙烯酸丙三醇酯、甲基丙烯酸羟乙酯、纳米致孔剂和引发剂的质量比为300-400:45-50:30-35:15-20:40-45:0.5-1。

所述步骤(2)中大孔吸附树脂、泊洛沙姆、N-羟甲基丙烯酰胺和水解聚马来酸酐的质量比为60-65:1-2:0.5-1:0.5-1。

所述步骤(3)中大孔吸附树脂、异氰尿酸三缩水甘油酯、纳米二氧化钛和衣康酸酐的质量比为60-65:5-10:3-5:0.1-0.2。