[发明专利]抗人ApoA1单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种抗人载脂蛋白A1(ApoA1)鼠源单克隆抗体D11‑10，所述ApoA1单抗D11‑10的重链亚型为IgG_2b，轻链亚型为κ，其重链、轻链可变区氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。相较于现有基于ApoA1多抗而建立的ApoA1检测方法，本发明基于该ApoA1单抗D11‑10建立的ApoA1检测方法，能够显著提高冠心病(CHD)的检出率，尤其对于HDL‑C在正常范围的CHD患者，检出率有显著提高。因此，本发明基于ApoA1单抗D11‑10建立的全新的检测方法，能更好体现ApoA1的检测值与心脑血管疾病的相关性，对于心脑血管疾病的诊断、预防和管理具有重要的临床意义。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种抗人载脂蛋白A1(ApoA1)鼠源单克隆抗体D11-10及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，以及利用该单克隆抗体在临床检测人外周血中ApoA1蛋白的含量以预测发生心脑血管疾病的风险及其对该疾病的诊断。

背景技术

载脂蛋白A1(ApoA1)是高密度脂蛋白(HDL)的主要结构蛋白，其生理作用在于能帮助HDL捕获游离胆固醇。此外，ApoA1还有稳定环前列腺素，促进血管舒张并抑制血小板凝聚，抵抗血管斑块形成等作用。

传统上，临床使用HDL-C和ApoA1蛋白的检测来反映体内HDL代谢的水平。血清/血浆中ApoA1和HDL-C水平的降低，提示心脑血管疾病(CHD、脑卒中等)的危险性增加，是心脑血管疾病危险性评价的灵敏指标之一。

然而目前有研究显示，在超过13万CHD患者中，逾4成患者的HDL-C水平处于正常范围，所以HDL-C并不能完全有效地反映疾病风险。贝特类、烟酸和胆甾醇酯转运蛋白(CETP)阻滞剂等提升HDL-C水平的药物都不能减少终点事件(全因或CHD引起的死亡率)，且无法降低卒中风险率，进一步提示HDL-C不能真实反应体内HDL的代谢情况。HDL由新生到成熟，再到被肝脏回收降解是一系列复杂的动态过程。通过超速离心和双向电泳的方法可以将体内代谢过程中的HDL分为不同的亚型，临床相关性研究显示HDL的亚型变化较HDL-C更能反应与心脑血管疾病的相关性。因此，监测体内特定的与疾病相关的功能性HDL亚型显得尤为重要。

目前实验室采用的HDL亚型分离和鉴定方法操作难度大、技术要求高、实验时间长，难于满足临床快速、高通量的检测要求，不适合临床应用。虽然检测血清中HDL的主要蛋白成分ApoA1，在一定程度能够反映体内HDL的代谢状态。但是，检测方法大多是基于ApoA1多克隆抗体的免疫学法，不能检测到HDL亚型的变化。因此，开发一种全新的、既能满足临床快速和高通量要求，又能检测与心脑血管疾病相关的HDL亚型的方法，对于心脑血管疾病的预防和管理具有重要的临床意义。

发明内容

本发明制备了一种ApoA1单克隆抗体D11-10，所述ApoA1单克隆抗体D11-10的重链亚型为IgG_2b，轻链亚型为κ，由BALB/c小鼠杂交瘤细胞株D11-10所分泌，所述BALB/c小鼠杂交瘤细胞株D11-10保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期为2017年3月9日，保藏编号CGMCC No.13807。保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明提供了一种ApoA1单克隆抗体D11-10，所述ApoA1单克隆抗体D11-10能够识别ApoA1蛋白特异抗原表位，并能据此甄别与心脑血管疾病相关的HDL特定亚型(D11-10亚型)。

本发明中，所述ApoA1单克隆抗体D11-10的重链可变区、轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；编码所述重链可变区、轻链可变区的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。