[发明专利]一种血浆中利培酮及9-羟基利培酮的检测方法

说明书

本发明公开了一种血浆中利培酮及9‑羟基利培酮的检测方法，包括如下步骤：(1)将血浆样品进行前处理，得到血浆样品上样液；(2)用高效液相色谱法对步骤(1)得到的血浆样品上样液进行测定，并分析血浆样品上样液的测定结果。本发明采用液液萃取方法提取血浆中的利培酮和9‑羟基利培酮，采用C4色谱柱进行检测，优化了提取条件及样品检测的色谱条件，利培酮和9‑羟基利培酮的萃取率提高，同时消除了血浆中内源物质干扰，可方便、快速检测血浆中的利培酮和9‑羟基利培酮，方法的专属性、准确度、精确度良好。

技术领域

本发明涉及一种利培酮及9-羟基利培酮的检测方法，尤其是一种血浆中利培酮及9-羟基利培酮的检测方法。

背景技术

利培酮，化学名称为3-[2-[4-(6-氟-1，2-苯并异恶唑-3-基)-1-哌啶基]乙基]-6，7，8，9-四氢-2-甲基-4H-吡啶并[1，2-α]嘧啶-4-酮，是苯并异恶唑衍生物，是新一代的抗精神病药。在体内部分代谢为9-羟基利培酮，具有同样的药理活性。利培酮是一种具有独特性质的选择性单胺能拮抗剂，它与5—羟色胺能的5-HT2受体和多巴胺的D2受体有很高的亲和力。利培酮也能与肾上腺素能受体结合，并且以较低的亲和力与H1—组胺能受体和α2-肾上腺素受体结合。利培酮不与胆碱能受体结合。利培酮是强有力的D2拮抗剂，可以改善精神分裂症的阳性症状，但它引起的运动功能抑制，以及强直性昏厥都要比经典的抗精神病药少，对中枢系统的5—羟色胺和多巴胺拮抗作用的平衡可以减少发生锥体外系副作用的可能，并将其治疗作用扩展到精神分裂症的阴性症状和情感症状。

目前从血浆中提取利培酮和9-羟基利培酮主要有两种方法，固相萃取法(SPE)和液液萃取法。SPE方法使用进口固相萃取小柱成本较高，液液萃取方法使用乙醚萃取时发现乙醚会使EP管材料中的一些组分溶出，与利培酮保留时间一致，干扰利培酮的测定；使用二氯甲烷萃取血浆中的活性成分时，因二氯甲烷密度较大，二氯甲烷在溶液底部，分离时较困难；将有机相中的利培酮和9-羟基利培酮反向萃取到酸性水相溶液中，水相溶液使用pH2.2磷酸盐缓冲液时，发现9-羟基利培酮的萃取率较低，还需要降低溶液的pH值；使用C18反相色谱柱进行血浆样品检测时，血浆中的内源物质有较多干扰。

发明内容

基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种血浆中利培酮及9-羟基利培酮的检测方法。本方法成本低，可方便检测人或动物血浆中的利培酮和9-羟基利培酮，方法重复性好，准确度高，可操作性强。

为实现上述目的，本发明所采取的技术方案为：一种血浆中利培酮及9-羟基利培酮的检测方法，包括如下步骤：

(1)将血浆样品进行前处理，得到血浆样品上样液；

(2)用高效液相色谱法对步骤(1)得到的血浆样品上样液进行测定，并分析血浆样品上样液的测定结果；

其中，高效液相色谱条件为：

a)色谱柱：C4柱，4.6mm×250mm，粒径5μm；

b)流动相为磷酸二氢钾溶液与乙腈的混合物，其中，所述磷酸二氢钾溶液与所述乙腈的体积比为65:35～85:15；流速为0.5～1.5mL/min；检测波长为278nm。

磷酸二氢钾与乙腈比例太高，利培酮、9-羟基利培酮及内标保留时间延长，增加分析时间，磷酸二氢钾与乙腈比例太少，9-羟基利培酮出峰较快，与血浆中组分不能有效分离，本申请发明人经过大量尝试，发现上述体积比的磷酸二氢钾溶液和乙腈混合，既能有效分离血浆中的组分，又能适当控制分析时间。

更优选地，所述磷酸二氢钾溶液与所述乙腈的体积比为77:23。此体积比的磷酸二氢钾溶液和乙腈混合作为流动相，能保证在控制分析时间的同时，使血浆中组分的分离效果更好。

优选地，高效液相色谱的进样量为100μL；柱温为35℃。