[发明专利]基于c-di-GMP合成相关基因的抗真菌和卵菌活性物质HSAF高产菌株构建及应用

权利要求书

1.c-di-GMP合成相关基因在构建抗真菌和卵菌活性物质HSAF生产菌株中的应用，其特征在于，所述c-di-GMP合成相关基因为：Lys2762、Lys0082、Lys0067、Lys0901、Lys0155、Lys2996、Lys2826、Lys3688、Lys3460和Lys3756；其中：Lys2762序列如SEQ ID No.1所示，Lys0082序列如SEQ ID No.2所示，Lys0067序列如SEQ ID No.3所示，Lys0901序列如SEQ IDNo.4所示，Lys0155序列如SEQ ID No.5所示，Lys2996序列如SEQ ID No.6所示，Lys2826序列如SEQ ID No.7所示，Lys3688序列如SEQ ID No.8所示，Lys3460序列如SEQ ID No.9所示，Lys3756序列如SEQ ID No.10所示。

2.一种抗真菌和卵菌活性物质HSAF生产菌株的构建方法，其特征在于连续敲除原始菌株中以下基因所获得的工程菌株：Lys2762、Lys0082、Lys0067、Lys0901、Lys0155、Lys2996、Lys2826、Lys3688、Lys3460和Lys3756；其中：Lys2762序列如SEQ ID No.1所示，Lys0082序列如SEQ ID No.2所示，Lys0067序列如SEQ ID No.3所示，Lys0901序列如SEQ ID No.4所示，Lys0155序列如SEQ ID No.5所示，Lys2996序列如SEQ ID No.6所示，Lys2826序列如SEQID No.7所示，Lys3688序列如SEQ ID No.8所示，Lys3460序列如SEQ ID No.9所示，Lys3756序列如SEQ ID No.10所示。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于具体方法如下：扩增要敲除的目的基因的上游片段和下游片段，片段双酶切后用连接酶连接于载体上，重组载体扩增后转化入产酶溶杆菌中，进行两次同源重组形成目标工程菌株。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于具体方法如下：扩增要敲除的目的基因的上游片段和下游片段，片段双酶切后用连接酶连接于同样经双酶切的pEX18GM载体上，重组载体扩增后转化入产酶溶杆菌中，涂布于含有庆大霉素的LB固体平板上，培养，形成第一次同源重组的转化子，转化子继续培养后，挑取单菌落，同时在LB+庆大霉素平板以及LB平板划线，选择只能够在LB平板上生长的转化子，即发生第二次同源重组的目标工程菌株。