[发明专利]微生物发酵生产N-乙酰-D-氨基葡萄糖和/或D-氨基葡萄糖盐的方法

权利要求书

1. 一种通过微生物发酵生产N-乙酰-D-氨基葡萄糖和/或D-氨基葡萄糖盐的方法，该方法包括：

A）在发酵培养基中培养微生物，微生物用包含编码N-乙酰-D-氨基甘露糖-6-磷酸异构酶的核酸序列的重组核酸分子转化，编码N-乙酰-D-氨基甘露糖-6-磷酸异构酶的核酸序列含有增加N-乙酰-D-氨基甘露糖-6-磷酸异构酶的酶活性的遗传修饰，所述遗传修饰为在对应于氨基酸序列SEQ ID NO：17的第133位半胱氨酸被精氨酸取代和第187位酪氨酸被组氨酸取代；和

B）收集从培养步骤A）中产生的N-乙酰-D-氨基葡萄糖。

2.如权利要求1所述的方法，其中，编码所述N-乙酰-D-氨基甘露糖-6-磷酸异构酶的核酸序列为SEQ ID NO：26。

3.如权利要求1所述的方法，其中，重组核酸分子中编码N-乙酰-D-氨基甘露糖-6-磷酸异构酶的基因拷贝数增加。

4.权利要求1所述的方法，其中，重组核酸分子中包含内源性天然启动子或具有比内源性天然启动子更高表达水平的启动子。

5.权利要求4所述的方法，其中，具有比内源性天然启动子更高表达水平的启动子选自HCE启动子、gap启动子、trc启动子、T7启动子。

6.如权利要求1所述的方法，其中，所述微生物进一步包含下述遗传修饰中的一种或多种：

（1）包含至少一种能提高微生物中D-氨基葡萄糖-6-磷酸脱氨酶作用的遗传修饰，并同时包含至少一种能降低氨基葡萄糖-6-磷酸合成酶作用的遗传修饰；

（2）包含至少一种能提高微生物中氨基葡萄糖-6-磷酸合成酶作用的遗传修饰，并同时包含至少一种能降低D-氨基葡萄糖-6-磷酸脱氨酶作用的遗传修饰；

（3）包含至少一种能提高微生物中UDP-N-乙酰-D-氨基葡萄糖-2-异构酶作用的遗传修饰。

7.如权利要求6所述的方法，其中，提高微生物中D-氨基葡萄糖-6-磷酸脱氨酶作用的遗传修饰选自a）微生物中D-氨基葡萄糖-6-磷酸脱氨酶的酶活性增加；和/或b）微生物中D-氨基葡萄糖-6-磷酸脱氨酶被过量表达。

8.如权利要求7所述的方法，其中，微生物用至少一种包含至少一种能提高微生物中D-氨基葡萄糖-6-磷酸脱氨酶作用的遗传修饰的重组核酸分子转化。

9.如权利要求7所述的方法，其中，微生物用至少一种包含编码D-氨基葡萄糖-6-磷酸脱氨酶的核酸序列的重组核酸分子转化。

10.如权利要求9所述的方法，其中，编码D-氨基葡萄糖-6-磷酸脱氨酶的核酸序列含有至少一种增加D-氨基葡萄糖-6-磷酸脱氨酶的酶活性的遗传修饰。

11.如权利要求10所述的方法，其中，重组核酸分子中编码D-氨基葡萄糖-6-磷酸脱氨酶的基因拷贝数增加。

12.如权利要求10所述的方法，其中，重组核酸分子中包含内源性天然启动子或具有比内源性天然启动子更高表达水平的启动子。

13.如权利要求12所述的方法，其中，具有比内源性天然启动子更高表达水平的启动子选自HCE启动子、gap启动子、trc启动子、T7启动子。

14.如权利要求7所述的方法，其中，微生物包括至少一种对编码D-氨基葡萄糖-6-磷酸脱氨酶的基因的内源性天然启动子的遗传修饰。

15.如权利要求14所述的方法，其中，编码D-氨基葡萄糖-6-磷酸脱氨酶的基因的内源性天然启动子被具有更高表达水平的启动子替换。