[发明专利]检测PKLR基因突变的方法、试剂盒、寡核苷酸及其应用

权利要求书

1.一种检测PKLR基因突变的试剂盒，所述试剂盒包括检测体系PCR扩增反应液和测序体系反应液，其特征在于，所述检测体系PCR扩增反应液包括多对扩增引物，所述测序体系反应液包括一对测序引物M13F和M13R，所述多对扩增引物为PKLR-1F/PKLR-1R、PKLR-2F/PKLR-2R、PKLR-3-4-5F/PKLR-3-4-5R、PKLR-6-7F/PKLR-6-7R、PKLR-8-9F/PKLR-8-9R、PKLR-10F/PKLR-10R和PKLR-11F/PKLR-11R，其碱基序列为：

PKLR-1F：TGTAAAACGACGGCCAGTAGAGGAAATGCCAGGAGATGA；

PKLR-1R：AACAGCTATGACCATGTTCACCCTCATTTTCCTCCTAT；

PKLR-2F：TGTAAAACGACGGCCAGTAGAGGGTATGCTGAGAGACGAA；

PKLR-2R：AACAGCTATGACCATGAAGAAGCACCTCAAGAAATACCA；

PKLR-3-4-5F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGGTTGCATCAGGGAATAAA；

PKLR-3-4-5R：AACAGCTATGACCATGGCCAAGGAGAAGGGAATGTG；

PKLR-6-7F：TGTAAAACGACGGCCAGTGACTATGGGTGGGTCGTTTCT；

PKLR-6-7R：AACAGCTATGACCATGCACCCACAGGTGTCCCTAAAA；

PKLR-8-9F：TGTAAAACGACGGCCAGTGTGTGGGTGTCAGAGAAGTAGC；

PKLR-8-9R：AACAGCTATGACCATGTGGCATTCTGTCTCTCCTGG；

PKLR-10F：TGTAAAACGACGGCCAGTGTGACACCTGGAACTGGAACA；

PKLR-10R：AACAGCTATGACCATGGACCACAGGAGAGAGGCAAG；

PKLR-11F：TGTAAAACGACGGCCAGTGCCAGGCTGGTCTCAAACT；

PKLR-11R：AACAGCTATGACCATGATGAGAATGGGAGACTGTGGA；

M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT；

M13R：AACAGCTATGACCATG。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述检测体系PCR扩增反应液还包括2×PCR Buffer、dNTPs和KOD FX DNA Polymerase。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述测序体系反应液还包括测序纯化液、牛小肠碱性磷酸酶、EDTA、无水乙醇、75%乙醇、HIDI和Bigdye Terminator V3.1。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述测序纯化液包括核酸外切酶I、牛小肠碱性磷酸酶。