[发明专利]一种特异性磁性Endoglin适配体成像探针系统的制备方法

说明书

本发明属于生物医学工程领域，具体涉及一种特异性磁性Endoglin适配体成像探针系统（mEND‑ Fe₃O₄@CMCS）的制备方法，采用水热法制备磁性Fe₃O₄纳米颗粒，以戊二醛为交联剂，利用乳化交联的方法制备磁性壳聚糖纳米颗粒Fe₃O₄@CMCS，再通过Sulfo‑SMCC的交联作用将Endoglin适配体修饰在Fe₃O₄@CMCS表面，得到磁性Endoglin适配体成像探针mEND‑ Fe₃O₄@CMCS，此方法制备的磁性Endoglin适配体成像探针mEND‑ Fe₃O₄@CMCS能有效的靶向小鼠肿瘤新生血管内皮细胞（mTEC）表面CD105分子，实现对荷肝癌移植瘤小鼠的MRI成像能力，具有灵敏度高、T2成像效率好、MRI造影效果好，同时低毒性、驰豫率高、生物相容性好且对肝脾具有靶向性等优点。

技术领域

本发明属于生物医学工程领域，具体涉及一种能靶向的特异性磁性Endoglin适配体成像探针系统（mEND- Fe₃O₄@CMCS）的制备方法。

背景技术

Endoglin（CD105）是一种分子量约为68 kd的细胞膜糖蛋白，是转化生长因子-β（TGF-β）受体复合物的组成成分之一，能独立存在于细胞表面，是与内皮细胞增殖相关且可被缺氧环境诱导的蛋白。核酸适配体（aptamer）是一类具有高度特异性以及高亲和力的核酸分子，通过指数富集系统（SELEX）从随机的寡核苷酸库中筛选而得到的小分子DNA或RNA，因此它对靶点具有较高的亲和力和特异性，可用于疾病的诊断和靶向治疗。磁性纳米材料具有磁学性能，使它能够对外加的磁信号或外部的磁场做出迅速的磁响应，通过一定的方法控制磁刺激信号，能使其高效地运用在磁性分离纯化、肿瘤药物靶向递送、肿瘤热疗以及核磁共振成像等方面。公开号为CN201410209779.8 的发明专利，公开了一种靶向抗肝癌纳米粒子及其制备方法，此方法操作复杂、费时且技术要求高，有副作用。制备由Endoglin适配体修饰的磁性mEND- Fe₃O₄@CMCS纳米探针，该探针能特异性结合肝癌新生肿瘤血管内皮细胞的方法未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种平均粒径大小为87.15±1.66 nm、成像效率好的特异性磁性Endoglin适配体成像探针mEND- Fe₃O₄@CMCS的制备方法，利用此探针系统能有效的靶向小鼠肿瘤新生血管内皮细胞（mTEC）表面CD105分子，实现对荷肝癌移植瘤小鼠的MRI成像能力。

为了解决这个技术问题，本方法采用如下步骤：

a．水热法制备磁性Fe₃O₄纳米粒子；

b. 磁性壳聚糖纳米颗粒Fe₃O₄@CMCS 的制备；

c. 磁性Endoglin适配体成像探针mEND- Fe₃O₄@CMCS 的制备：将步骤b中的磁性壳聚糖纳米颗粒Fe₃O₄@CMCS溶解于HEPES缓冲液中，加入sulfo-SMCC，恒温摇床孵育；

磁力架分离已交联SMCC的磁性颗粒，加入2-Endoglin适配体到交联过的磁性粒子中，混匀，恒温摇床孵育，然后加入牛血清蛋白，封闭；

用偶联缓冲液洗涤纳米粒子2-3次，磁分离，得到磁性Endoglin适配体成像探针mEND- Fe₃O₄@CMCS。

本发明与现有技术相比具有如下优点