[发明专利]一种通经活络胶囊中微生物限度检查方法

权利要求书

1.一种通经活络胶囊中微生物限度检查方法，其特征在于，所述胶囊为孕坤通胶囊，该方法依次包括下述步骤：

1)菌液制备

取经33℃培养24h的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌胰酪大豆胨液体培养液及25℃培养24h的白色念珠菌沙氏葡萄糖液体培养液，用0.9％无菌氯化钠溶液制成含菌数为1000～10000cfu/ml的菌悬液，备用；取经25℃培养7天的黑曲霉沙氏葡萄糖琼脂斜面，加入5ml含0.05％聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，用带有棉花的球形吸管吸出孢子悬液，用含0.05％聚山梨酯80的0.9％无菌氯化钠溶液制成含孢子数为1000～10000cfu/ml的孢子悬液，备用；

2)供试液制备

取本品10g，加入预热至45℃的胰酪大豆胨液体培养基至100ml，45℃气浴振摇20min，混匀，作为1:10供试液；

3)方法建立及回收率试验

确定采用稀释法进行需氧菌总数的测定、采用常规法进行霉菌和酵母菌总数的测定；

4)控制菌检验方法的建立及验证

采用常规法进行大肠埃希菌检查；

步骤3)所述的常规法进行霉菌和酵母菌总数的测定依次包括下述步骤：

试验组：吸取1:10供试液9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；另从真菌试管中分别吸取1ml至平皿中，倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；每株试验菌平行制备2个平皿；

菌液对照组：吸取胰酪大豆胨液体培养基9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；另从真菌试管中分别吸取1ml至平皿中，倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；每株试验菌平行制备2个平皿；

供试品组：吸取1:10供试液1ml至平皿，平行制备4个平皿，其中2个倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，另外2个倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；

稀释剂组：吸取胰酪大豆胨液体培养基1ml至平皿，平行制备4个平皿，其中2个倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，另外2个倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基；

各平皿倾注琼脂培养基，待凝固后，分别置培养3－5d，测定需氧菌总数、霉菌和酵母菌数，计算其回收率。

步骤3)所述的所述的稀释法依次包括下述步骤：

供试液制备

取本品10g，加入预热至45℃的胰酪大豆胨液体培养基至100ml，45℃气浴振摇20min，混匀，作为1:10供试液；吸取1:10供试液20ml加入80ml胰酪大豆胨液体培养基中，摇匀制成1:50供试液；

试验组：吸取1:50供试液9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿；

菌液对照组：吸取胰酪大豆胨液体培养基9.9ml，共5份，每份中加入0.1ml的试验菌悬液，摇匀，分别从试验菌试管中吸取1ml至平皿中，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；每株试验菌平行制备2个平皿；

供试品组：吸取1:50供试液1ml至平皿，平行制备2个平皿，倾注胰酪大豆胨琼脂培养基；

各平皿倾注琼脂培养基，待凝固后，分别置培养3d，测定需氧菌总数，计算其回收率。

2.根据权利要求1所述的一种通经活络胶囊中微生物限度检查方法控制菌检验方法的建立及验证依次包括下述步骤：

1)菌种

取经33℃培养24h的大肠埃希菌胰酪大豆胨液体培养液，用0.9％无菌氯化钠溶液制成含菌数为10～100cfu/ml的菌悬液，备用；

2)供试液制备

取本品10g，加入预热至45℃的胰酪大豆胨液体培养基至100ml，45℃气浴振摇20min，混匀，作为1:10供试液

3)试验方法：

取供试品组样品做控制菌检查法检查；

阳性对照试验取供试品组，并加入相应的阳性菌菌液1ml进行培养，作相应控制菌检查法检查；

取稀释液10ml代替做控制菌检查法检查，作为阴性对照。

3.根据权利要求2所述的一种通经活络胶囊中微生物限度检查方法，其特征在于，所述的大肠埃希菌检测方法依次包括下述步骤：

取1：10供试液10ml接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，33℃培养24h；取培养物1.0ml，接种至100ml麦康凯液体培养基中，44℃培养24h，取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂平板，33℃培养24h，观察其菌落形态。