[发明专利]猪伪狂犬病焦磷酸测序检测方法及专用引物

权利要求书

1.一种检测猪伪狂犬病毒的成套引物，包括如下引物对：

所述引物对由序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成。

2.根据权利要求1所述的成套引物，其特征在于：所述引物对中的一条引物末端生物素标记。

3.根据权利要求1或2所述的成套引物，其特征在于：所述成套引物还包括核苷酸序列为序列表中序列3的测序引物。

4.含有权利要求1-3任一所述成套引物的成套PCR试剂或含有所述成套引物或所述成套PCR试剂的试剂盒；

或序列4第81-135位所示的DNA分子。

5.根据权利要求4所述的成套PCR试剂，其特征在于：

所述成套PCR试剂由PCR试剂1和PCR试剂2组成；

所述PCR试剂1为含有权利要求1-3任一所述成套引物中所述引物对的试剂；

或，所述引物对中每条引物在所述PCR试剂1中的浓度为20μM；

所述PCR试剂2为含有权利要求1-3任一所述成套引物中所述测序引物的试剂；

或，所述测序引物在所述PCR试剂2中的浓度为0.3μM。

6.权利要求1-3任一所述成套引物或权利要求4所述的成套PCR试剂或试剂盒或序列4第81-135位所示的DNA分子在检测或辅助检测猪伪狂犬病毒中的应用；

或，权利要求1-3任一所述成套引物或权利要求4所述的成套PCR试剂或试剂盒或序列4第81-135位所示的DNA分子在制备检测或辅助检测猪伪狂犬病毒产品中的应用；

或，权利要求1-3任一所述成套引物或权利要求4所述的成套PCR试剂或试剂盒或序列4第81-135位所示的DNA分子在检测或辅助检测待测样本中是否含有猪伪狂犬病毒中的应用；

或，权利要求1-3任一所述成套引物或权利要求4所述的成套PCR试剂或试剂盒或序列4第81-135位所示的DNA分子在制备检测或辅助检测待测样本中是否含有猪伪狂犬病毒产品中的应用。

7.一种检测或辅助检测待测样本中是否含有猪伪狂犬病毒的方法，包括如下步骤：

1)用序列表中序列1所示的单链DNA分子和序列表中序列2所示的单链DNA分子组成的引物对对待测样本进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；

2)用核苷酸序列为序列表中序列3的测序引物对所述PCR扩增产物进行焦磷酸测序，得到PCR扩增产物测序结果；

若所述PCR扩增产物测序结果与序列4第81-135位所示的DNA分子的同源性大于等于80％，则所述待测样本中含有或候选含有猪伪狂犬病病毒，若所述PCR扩增产物测序结果与序列4第81-135位所示的DNA分子的同源性小于80％，则所述待测样本中不含有或不候选含有猪伪狂犬病病毒。

8.一种检测或辅助检测待测样本中是否含有猪伪狂犬病毒的方法，包括如下步骤：

检测待测样本的核酸中是否含有序列4第81-135位所示的DNA分子或与其同源性大于等于80％的DNA分子，若含有，则所述待测样本含有或候选含有猪伪狂犬病毒，若不含有，则所述待测样本不含有或候选不含有猪伪狂犬病毒。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述检测待测样本的核酸中是否含有序列4第81-135位所示的DNA分子或与其同源性大于等于80％的DNA分子的方法包括如下步骤：权利要求7的步骤1)和步骤2)，得到PCR扩增产物测序结果，分析所述PCR扩增产物测序结果是否含有序列4第81-135位所示的DNA分子。

10.根据权利要求7-9中任一所述的方法，其特征在于：

所述PCR扩增的退火温度为55℃，退火时间为30S；

或，所述PCR扩增的模板为所述待测样本的核酸。