[发明专利]卤泛曲林的高效液相检测方法

说明书

本发明公开一种卤泛曲林的高效液相检测方法，采用反相C18色谱柱、DAD检测器，流动相A是甲酸‑乙酸铵的水溶液和乙腈的混合溶液，流动相B是甲酸‑乙酸铵的乙腈溶液和水的混合溶液，采用梯度洗脱。本方法进样3～5ul，能够有效检出卤泛曲林及其有关物质，并且分离度R能达1.5以上，基线平稳，不发生漂移；检测时间短，只需3min即可完成高效液相检测过程，而现有技术中的检测方法需进样10～25ul，至少15min以上才能完成检测，本方法大大降低了样品耗量，节省溶剂，降低成本，提高了检测效率，适合高通量筛选；本方法用于卤泛曲林的含量测定，具有良好的线性关系，重现性高。

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，具体涉及一种卤泛曲林的高效液相检测方法。

背景技术

疟疾是一种危害严重的疾病，当前全世界约1亿人口受疟原虫感染。由于抗药性恶性疟原虫的产生与扩散，使氯喹和其他一些抗疟药的应用受到限制。美国walter医学研究所和Smith kline实验室先后发现卤泛曲林及其代谢物对氯喹敏感或有抗性的恶性疟原虫均具有同样的疗效。

卤泛曲林(Halofantrine HCl)，又名卤泛群、氯氟菲醇，是菲醇类的新型抗疟原虫红内期裂殖体杀灭药，其抗疟原虫作用同氯喹相仿，主要作用于食物泡和线粒体。对各种疟疾包括多种药物有抗性的恶性疟均有效，临床平均治愈率为95％，药物副作用轻，患者耐受性良好。

关于卤泛曲林的HPLC分析方法及含量测定，现有技术已有报道(Maria HotoftMichaelsen,Olena Sivak,Researh Article.2015,20)，其检测方法是：原料采用HPLCP680，Waters x-bridge C8色谱柱，acetonitrile/0.2％SDS+0.2％glacial acetic acidin water(80:20,v:v)流速0.8ml/min，进样量10ul，在257nm波长处检测；生物样品采用acetonitrile/0.2％SDS+0.2％glacial acetic acid in water(85:15,v:v)作为流动相，进样25ul，流速1.0ml/min，该方法主要是对卤泛曲林的释放及代谢进行检测。发明人按该方法对卤泛曲林含量进行测试，发现HPLC谱的分离效果差，分离度R小于1，无法有效检出个别工艺杂质峰或有关物质峰，洗脱时基线有漂移，积分不准确，其用于定量分析时的精确度和准确度不高，且检测需要15min以上，耗时长。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种检测时间短、分离效果好、精确度和准确度更高的卤泛曲林的高效液相检测方法。

为解决上述技术问题，本发明提供的卤泛曲林的高效液相检测方法，色谱条件如下：

色谱柱采用反相C18色谱柱；

检测器采用DAD检测器；

流动相包括流动相A和流动相B；流动相A是甲酸-乙酸铵的水溶液和乙腈的混合溶液，水溶液中甲酸体积浓度为0.01～0.03％，水溶液中乙酸铵浓度为0.5～1.5mM，水溶液与乙腈的体积比为100～95：0～5；流动相B是甲酸-乙酸铵的乙腈溶液和水的混合溶液，乙腈溶液中甲酸体积浓度为0.01～0.03％，乙腈溶液中乙酸铵浓度为0.5～1.5mM，乙腈溶液与水的体积比为100～95：0～5；

采用梯度洗脱，梯度洗脱程序按以下程序进行：0～0.01min，流动相B保持体积百分比为20％；0.01～2.10min，流动相B体积百分比由20％递增至90％；2.10～2.11min，流动相B体积百分数由90％递减至20％；2.11～3.00min，流动相B保持体积百分数为20％。

在一个优选的实施例中，流动相A是甲酸-乙酸铵的水溶液和乙腈的体积分数为95：5的混合溶液，流动相B是甲酸-乙酸铵的乙腈溶液和水的体积分数为95：5的混合溶液。