[发明专利]一种抑制芸苔属植物花柱NADPH氧化酶基因表达的方法

权利要求书

1.一种抑制芸苔属植物花柱NADPH氧化酶基因表达的方法，其特征在于：包含以下步骤：

1)互补核苷酸链和引物合成：根据目的基因的序列，设计荧光定量PCR引物；并根据其二级结构，在其茎环处设计一段互补核苷酸链；所述目的基因为NADPH氧化酶基因；

2)培养基配置：10％MS培养基、1.0％琼脂糖、80mM蔗糖，加入互补核苷酸链，使其终浓度达到400μM；

3)花柱培养：将芸苔属植物花柱切下，放入培养基中培养，4小时后，提取其花柱RNA，并反转录成cDNA。

4)基因表达量测定：将反转录的cDNA作为模板，通过荧光定量PCR测定其NADPH氧化酶基因表达量。

2.根据权利要求1所述的基因表达的方法，其特征在于：所述互补核苷酸链是在所述目的基因发卡环、内部环、膨胀环和多分枝环等可能的结合位点上，设计出互补核苷酸链，并进行硫代硫酸酯修饰和HPLC纯化。

3.根据权利要求2所述的基因表达的方法，其特征在于：所述互补核苷酸链(5’-3’)为：ATTCTTGTCCACTATGTC 。

4.根据权利要求1所述的基因表达的方法，其特征在于：基因表达量测定中根据NADPH氧化酶基因(登陆号：XM_009114548.2)的基因序列设计：引物序列(5’-3’)为：

正向：GAACAGCACAGGAAGCAACA；反向：AGCTCTGCCACTTCGTTCAT。

5.根据权利要求4所述的基因表达的方法，其特征在于：所述正向、反向引物(10μM)各1μL；模板1μL；SsoFast EvaGreen supermix10μL；无酶水7μL。