[发明专利]一种新型小分子结构及其在检测蓝绿藻肝毒素方面的应用

说明书

本发明公开了一种新型小分子结构及其在检测蓝绿藻肝毒素方面的应用。所述新型小分子结构的结构式如式（I）所示：本发明首先获得了一种特殊的新型小分子结构作为免疫原，将该小分子及微囊藻毒素MC‑LR分别与载体蛋白偶联制得人工抗原，利用将该小分子人工抗原制备多克隆抗体，制备抗体标记的纳米金颗粒，将MC‑LR人工抗原包被于硝酸纤维膜上作为检测带，羊抗兔二抗作为控制带，依据免疫竞争法原理建立得快速检测蓝绿藻肝毒素的广谱性免疫层析试纸条。该免疫层析试纸条灵敏性度高、广谱性强，可半定量检测蓝绿藻肝毒素，适用于多种微囊藻毒素类似物和节球藻毒素，且具有快速、直观、易于操作等优势。

技术领域

本发明属于食品安全技术领域。更具体地，涉及一种新型小分子结构及其在检测蓝绿藻肝毒素方面的应用。

背景技术

随着工业化、城市化的发展，大量营养物注入水中造成水体富营养化，而致使藻类迅猛生长，藻类代谢产生包括蓝绿藻肝毒素(微囊藻毒素，节球藻毒素)在内的有毒物质，危害着人类健康。我国是世界上藻灾害最为严重的国家之一，淡水湖泊中发生的水华80％是有毒的，而微囊藻毒素分布最广、毒性最大。

微囊藻毒素(Microcystins，MCs)主要由淡水藻类铜绿微囊藻产生。MCs是一类单环七肽肝毒素，由于多肽中两种可变氨基酸组成的不同，主要有L、R、Y、W和F，分别代表亮氨酸、精氨酸、酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸，因而具有多种异构体，其中存在最普遍，含量最多的是MC-LR、MC-YR和MC-RR三种，其他还包含MC-WR、MC-LA、MC-LW、MC-LY和MC-LF等在内的80多种。而Adda基团(3-氨基-9-甲氧基-2,6,8-三甲基-10-苯基-4,6-二烯酸)是一种特殊的β-氨基酸，是微囊藻毒素类物质共同拥有的结构，且其为主要表达毒性的部分。MCs分布最广泛，它对蛋白磷酸酶1和蛋白磷酸酶2A具有抑制作用，为肿瘤促进剂。1998年世界卫生组织(WHO)的《用水卫生标准》中建议饮用水中MCs标准为1.0μg/L。我国生活饮用水卫生标准(GB 5749-2006)的颁布，将饮用水中微囊藻毒素含量限制为1μg/L，该标准的实施对水源水的质量提出了更高的要求。

节球藻毒素(Nodularin，NOD)也是一种蓝藻水华腐烂后释放于水中的毒素之一，主要存在于泡沫节球藻中。NOD为环状五肽肝毒素，已分离得到7种节球藻毒素异构体，也都具备Adda基团，是丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶1(PP1)和蛋白磷酸酶2A(PP2A)的抑制剂，同时也是肿瘤诱发挤和促进剂，其对人类的危害可见一斑，但目前仍没有NOD的限量标准，但设置其限量标准势在必行。

目前，微囊藻毒素和节球藻毒素的检测方法主要有薄层色谱(Thin Layerchromatography，TLC)、高效液相色谱(High performance liquid chromatography，HPLC)、气相色谱(Gas chromatography,GC)、质谱(Mass sepectrum,MS)以及高效液相-质谱联用(High performance liquid chromatography-mass sepectrum，HPLC-MS)等方法。这些方法虽然准确度高，但其仪器设备昂贵、样品前处理复杂繁琐、检测成本高且需要专业人员操作。而免疫层析检测方法具备快速、灵敏、准确、操作简便等特点，且对样品纯度要求不高，特别适用于大批量样品的检测。

目前已报道的蓝绿藻肝毒素(多种微囊藻毒素类似物和节球藻毒素)制备的抗体大多使用MC-LR和NOD偶联蛋白制备抗原、抗体，而其抗体特性也有很大差异，广谱性也受到免疫原和包被原的限制。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术中缺乏同时检测多种微囊藻毒素结构类似物和节球藻毒素的免疫学检测方法，提供一种近似于共同基团Adda的新型小分子物质，以增加检测方法的广谱识别性能，制备出灵敏性度高且广谱性强的半定量蓝绿藻肝毒素免疫层析试纸条，适用于多种微囊藻毒素类似物和节球藻毒素，且具有快速、直观、易于操作等特点，可作为检测主要蓝绿藻肝毒素的有效手段，具有广阔的发展前景。