[发明专利]一种诱导循环肿瘤细胞转移的可移植支架的制备方法

说明书

本发明公开了一种诱导循环肿瘤细胞转移的可移植支架的制备方法，具体步骤如下：将PDMS旋涂形成薄膜，固化；对上述得到的PDMS膜进行等离子体处理，使其表面带负电；在PDMS膜表面滴加阳离子聚合物溶液，旋涂，再滴加清水，旋涂，再喷含涂外泌体的PBS溶液，再滴加阴离子聚合物溶液，旋涂，再滴加清水，旋涂，依此循环，在PDMS表面形成负载有外泌体的层层自组装膜；将PDMS从基底上揭下，使用环氧己烷气体消毒即得。本发明为柔性薄膜，具有很好的变性能力和机械性能，可克服因空间受限导致的移植困难；利用层层自组装技术对PDMS进行了修饰，在保留生物相容性、不可降解性以及良好的变形能力和机械性能的同时实现了外泌体/药物的负载和缓释。

技术领域

本发明涉及组织工程技术领域，具体是一种诱导循环肿瘤细胞转移的可移植支架的制备方法。

背景技术

恶性肿瘤转移至功能器官(肺部、肝脏、脑部等)所导致的并发症是肿瘤死亡的主要原因。循环肿瘤细胞(circulating tumor cells，CTCs)是一类由实体瘤或转移灶释放进入外周血循环的肿瘤细胞，现有的研究证明它在恶性肿瘤术后复发和远端转移中发挥重要作用。然而，目前主流的肿瘤治疗手段，例如化疗、放疗、手术切除都难以彻底清除这些循环肿瘤细胞。

外泌体是一种细胞分泌的具有脂质双分子层结构的纳米囊泡，粒径分布为30-100nm，在体内分布十分广泛。其囊泡内含有脂质、蛋白、核酸等具有生物活性的分子，在细胞间的相互通讯中发挥着十分重要的作用。

近期的研究发现CTCs对转移器官的选择是通过其与转移前微环境相互沟通实现的。而外泌体在这种沟通机制中担任信使的角色，它像“侦察舰”一样，触发转移前微环境中必要的炎症、血管形成等分子反应来欢迎肿瘤细胞的“归巢”。蛋白质组学研究显示，肿瘤外泌体中的整合素(integrin)蛋白质对肿瘤的特异性转移起到决定作用，不同种类整合素决定肿瘤的不同转移方向，在肺转移中外泌体integrinsα6β4和α6β1起关键作用，而外泌体中integrinαvβ5在肝转移中起关键作用。如果下调integrinsα6β4和αvβ5，能分别阻止肝肺转移。这些蛋白存在于外泌体膜上，理论上，目的地“标记”应该存在于这里。层层自组装所构建的局部结构作为一个孵育场所，给肿瘤细胞转移首先提供一个物理的微环境，其内的肿瘤来源的外泌体带有以上等成分，以此招募循环肿瘤细胞，在层层自组装所在部位驻留。

综上，利用外泌体的在非关键部位形成转移前微环境来诱导循环肿瘤细胞向这些非关键部位转移从而控制肿瘤转移方向将成为一种肿瘤治疗的新方法。

为了实现在体内长期定植以诱导CTCs转移的目的，要求支架材料具有很好生物相容性的同时具有缓慢的降解性。但目前满足此类要求的支架材料，例如硅胶类材料，其结构比较致密无法用于外泌体及药物的负载和缓释，而且其制备过程也很容易使具有生物活性的分子失活。因此需要对其作必要的修饰和改进。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有很好的变性能力和机械性能的诱导循环肿瘤细胞转移的可移植支架，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种诱导循环肿瘤细胞转移的可移植支架的制备方法，具体步骤如下：

(1)将PDMS旋涂形成薄膜，固化；

(2)对上述得到的PDMS膜进行等离子体处理，使其表面带负电；

(3)在PDMS膜表面滴加阳离子聚合物溶液，400-5000rpm/min旋涂30-90s，再滴加清水，400-5000rpm/min旋涂30-90s，再喷含涂外泌体的PBS溶液，再滴加阴离子聚合物溶液，400-5000rpm/min旋涂30-90s，再滴加清水，400-5000rpm/min旋涂30-90s，依此循环20-200次，在PDMS表面形成负载有外泌体的层层自组装膜；