[发明专利]云南木鳖组织培养快速繁殖的方法

权利要求书

1.云南木鳖组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)外植体选择：选择生长健壮、无病虫害的幼嫩茎段，去除多余叶片，放入0.1%的洗衣粉或洗洁剂中浸泡3-5min，在自来水中冲洗10-15 min，用纯净水清洗1-2次；

(2)消毒处理：将外植本放入玻璃瓶中，置于超净工作台上，用浓度75%的酒精消毒30-40s，用无菌水冲洗1次，再置于0.08-0.1%氯化汞溶液中灭菌5-8 min，然后用无菌水冲洗5-6次，放在无菌过滤纸上吸干水分，备用；

(3)诱导培养：将处理好的外植体切成长2-3cm，带1-2节的茎段，接种于诱导培养基中培养，诱导培养基组分为：N₆+6-BA1.0-1.5mg/L+NAA0.05-0.1 mg/L+蔗糖25g/L+琼脂5g/L，PH值为5.8-6.0，暗培养5-7d，光照强度为1600-1800lx，光照时间8-10h/d，培养温度（25±2℃），养时间50-60d，诱导大量的丛生芽；

(4)继代增殖培养：将丛生芽中的小芽长至4cm以上，切成带1-2节的茎段，接种于继代增殖培养基中培养，继代增殖培养基组分为：N₆+6-BA0.5-1.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L+马铃薯泥2-5%+活性炭1-2g /L+蔗糖25g/L+琼脂5g/L，PH值为5.8-6.0，光照强度为1800-2000lx，光照时间10-12h/d，培养温度（25±2℃），培养15-20d，分化出丛生芽长2-3cm，培养时间60-70d，丛生芽长4-6cm；

(5)生根培养：将丛生芽小芽长至2cm以上，切成单株接种于生根培养基中培养，生根培养基组分为：N₆+6-BA0.3-0.6mg/L+NAA0.2-0.5mg/L+香蕉泥5-10%+活性炭2-3g /L+蔗糖20g/L+琼脂5g/L，PH值为5.8-6.0，光照强度为2000-2200lx，光照时间10-12h/d，培养温度（25±2℃），培养时间50-60d，获得带根茎叶完整小植株苗；

(6)炼苗与移栽：将株高3-5cm，根长2-4cm，生根数在3根以上时，置于自然光温室大棚苗床上炼苗15-20d后，取出生根苗，洗净根部的培养基，置于1000倍多菌灵溶液浸泡5-7 cm，捞出晾干至根发白，移栽于腐质土：火烧土：腐熟艾蒿体积比为5：3：2的混合基质中，荫蔽度80-85%，相对湿度70-80%，温度22-30℃，移栽10d后，用低浓度MS母液喷洒。

2.根据权利要求1所述的云南木鳖组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，步骤（1）和（2）中，所述的去污剂为洗洁精或洗衣粉溶液：所述的氯化汞水溶液中，氯化汞使用浓度为0.08-0.1%。

3.根据权利要求1所述的云南木鳖组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，步骤 （3）中，所述的诱导培养基组分为：N₆+6-BA1.0-1.5mg/L+NAA0.05 -0.1mg/L+蔗糖25g/L+琼脂5g/L，PH值为5.8-6.0，暗培养5-7d，光照强度为1600-1800lx，光照时间8-10h/d，培养温度（25±2℃），养时间50-60d，诱导大量的丛生芽。

4.根据权利要求1所述的云南木鳖组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，步骤 （4）中，所述的继代增殖培养基组分为：N₆+6-BA0.5-1.0mg/L+NAA0.1-0.2mg/L+马铃薯泥2-5%+活性炭1-2g /L+蔗糖25g/L+琼脂5g/L，PH值为5.8-6.0，光照强度为1800-2000lx，光照时间10-12h/d，培养温度（25±2℃），培养15-20d，分化出丛生芽长2-3cm，培养时间60-70d，丛生芽长4-6cm。

5.根据权利要求1所述的云南木鳖组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，步骤 （5）中，所述的生根培养基组分为：N₆+6-BA0.3-0.6mg/L+NAA0.2-0.5mg/L+香蕉泥5-10%+活性炭2-3g /L+蔗糖20g/L+琼脂5g/L，PH值为5.8-6.0，光照强度为2000-2200lx，光照时间10-12h/d，培养温度（25±2℃），培养时间50-60d，获得带根茎叶完整小植株苗。

6.根据权利要求1所述的云南木鳖组织培养快速繁殖的方法，其特征在于，步骤 （6）中，所述的将株高3-5cm，根长2-4cm，生根数在3根以上时，置于自然光温室大棚苗床上炼苗15-20d后，取出生根苗，洗净根部的培养基，置于1000倍多菌灵溶液浸泡5-7 cm，捞出晾干至根发白，移栽于腐质土：火烧土：腐熟艾蒿体积比为5：3：2的混合基质中，荫蔽度80-85%，相对湿度70-80%，温度22-30℃，移栽10d后，用低浓度MS母液喷洒。