[发明专利]培养上皮细胞的组合物及其保持上皮样细胞形态中的应用在审
申请号: | 201710227819.5 | 申请日: | 2017-04-07 |
公开(公告)号: | CN106906178A | 公开(公告)日: | 2017-06-30 |
发明(设计)人: | 郭晓令;葛仁山;陈建苏;连瑞玲;朱德良;李超;李晓珩;王秀娣;陈勇;陈显武;段越 | 申请(专利权)人: | 温州医科大学附属第二医院;温州医科大学附属育英儿童医院 |
主分类号: | C12N5/071 | 分类号: | C12N5/071 |
代理公司: | 上海市海华永泰律师事务所31302 | 代理人: | 包文超 |
地址: | 325027 浙江*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 培养 上皮细胞 组合 及其 保持 上皮 细胞 形态 中的 应用 | ||
技术领域
本发明涉及一种细胞培养组合物,尤其涉及一种用于上皮细胞培养的组合物,在体外培养的环节中,使上皮细胞保持上皮样细胞形态,以利于细胞移植。
背景技术
上皮细胞最主要的功能就是形成动态的屏障来调剂组织内细胞之间的物质和信号的传递。
视网膜色素上皮细胞(Retinal Pigment Epithelium,RPE细胞)是位于脉络膜和视网膜神经层之间的一层单层细胞,在维持光感受器细胞和视网膜正常功能上发挥重要作用,包括:吸收杂散光,形成脉络膜和视网膜之间的屏障,产生视觉色素,给神经视网膜提供营养,以及吞噬光感受器细胞脱落的外节段(Physiol.Rev.2005,85,845~881)。RPE细胞降解或受损是产生色素性视网膜炎,老年性黄斑病变,斯特格氏病等疾病的原因(Adv.Exp.Med.Biol.2012,724,15~36)。很多延缓RPE细胞降解的研究正在进行,而采用细胞治疗的方法来取代受损伤的RPE细胞也许是治疗这些疾病最有效的方法(Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.2009,50,1848~1855;Br.J.Ophthalmol.2010,94,1337~1343)。
在组织原位,RPE细胞具一般上皮细胞的形态,形成紧密的铺路石样单层结构。但是体外培养和传代培养的RPE细胞很容易发生形态的改变,从而导致上皮向间充质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)的发生,最终形成纤维样形态改变。RPE细胞发生形态改变通常伴随着功能的丧失和改变,比如:屏障功能,膜极性功能等(Methods Mol.Biol.2013,945,45~65;PloS one 2011,6,e23322;Mol.Vis.2008,14,1414~1428)。
发明内容
本发明的一个目的在于提供一种培养上皮细胞的组合物,以利于上皮细胞的体外培养,避免上皮向间充质转化现象的发生。
本发明的另一个目的在于提供一种培养RPE细胞的组合物,以利于RPE细胞的体外培养,避免其向间充质转化现象的发生。
本发明的再一个目的在于提供一种组合物在保持上皮样细胞形态中的应用,在上皮细胞的体外培养中保持上皮样细胞形态,避免上皮向间充质转化现象的发生。
本发明的又一个目的在于提供一种组合物在保持RPE细胞形态中的应用,在RPE细胞的体外培养中保持上皮样细胞形态,避免上皮向间充质转化现象的发生。
一种培养上皮细胞的组合物,包括0.2v/v%~2v/v%基质胶(Matrigel)和50ng/mL~150ng/mL激活素A(Activin A)。
本发明提供的组合物,基质胶优先选择1v/v%。
本发明提供的组合物,激活素优先选择100ng/mL。
本发明提供的组合物用于上皮细胞的体外培养,对体外培养的上皮细胞培养板于0.2v/v%~2v/v%基质胶中孵育,培养基中加入50ng/mL~150ng/mL激活素A进行处理。
本发明提供的组合物用于上皮细胞的体外培养,细胞按密度为1×106个/孔于培养板中培养。
本发明提供的组合物用于上皮细胞的体外培养,培养基为含有10w/w%FBS,100U/mL P/S的高糖DMEM培养基(DMEM/HG)。
本发明提供的组合物,适用于上皮细胞的体外培养,尤其适用于RPE细胞体外培养,保持上皮样细胞形态,膜极性和屏障功能,以及细胞的正常表型和吞噬功能。
本发明技术方案实现的有益效果:
本发明提供的组合物,适用于上皮细胞体外培养,能使上皮细胞维持正常的上皮样形态。分离培养的RPE细胞经过Matrigel和Activin A(MA)处理,能较好的维持紧密结合上皮样细胞形态至少10代以上。同时这些细胞能正常表达RPE特异性标志蛋白,并具有正常吞噬FITC标记光感受器外节段和膜极性功能。
附图说明
图1为本发明组合物用于上皮细胞培养于倒置显微镜下所观察到的RPE细胞形态,其中:A为group-A组(未经过MA处理)的RPE细胞在P2,P4,P6,P8和P10代呈现梭型结构;B为group-B组(经过MA处理)的RPE细胞在P0,P2,P4,P6,P8和P10代能维持很好的上皮样结构;C为经过Matrigel或Activin A处理的RPE细胞在P4代呈现上皮和梭型的混合结构;
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