[发明专利]一种用于检测RhD阴性表型的SNP标记

说明书

本发明的目的是提供一种用于检测RhD阴性血型的SNP标记，包含有第一SNP标记，是RHD基因编码区域由起始密码子起第208位碱基发生了突变，由C突变为T；第二SNP标记，是RHD基因编码区域由起始密码子起第211位碱基发生插入了G，导致后续移码突变。本发明通过检测筛选获得的SNP位点，从而提供了一种有效的进行RhD血型基因诊断途径，应用效果表明本发明所提供的基因的SNP位点及检测引物可以有效的用于临床患者及血站献血员进行RHD基因的快速检测。

技术领域

本发明属于基因诊断制品技术领域，具体涉及一种用于检测红细胞RhD阴性血型的SNP标记。

发明背景

Rh血型系统(Rhesus monkeys)是由著名科学家、诺贝尔奖得主Karl Landsteiner率先从恒河猴的红细胞上发现，故因此得名。Rh血型系统是目前人类36个血型系统中最复杂的，其重要性仅次于ABO系统，在临床输血、新生儿溶血病的诊治中占有重要地位。Rh血型系统中D抗原是免疫原性最强、多态性最复杂的。对于中国大陆的汉族人来讲，RhD阴性人群只占千分之三左右，由于十分罕见，故又名熊猫血。由于RhD的强抗原性，导致RhD阴性者不能接受RhD阳性血液，因为RhD抗原将刺激RhD阴性人体产生抗-RhD抗体。如果再次输入RhD阳性血液，即可导致溶血性输血反应。同样，若RhD阴性妇女由于妊娠或输血刺激体内产生抗-RhD抗体，再次怀孕则会导致新生儿溶血病的发生。

RhD血型系统而除了正常的RhD阳性、阴性外，还存在许多变异型，包括弱D(weakD)、部分D(partial D)及DEL型(放散型)。这些变异型的红细胞表面存在不完全的、或者变异的RhD抗原，若输注给阴性个体也有可能刺激产生抗体，因此这些变异型的个体有两个主要特点：一是他们作为受血者和献血者是不同的两种处理，作为受血者，他们只能输入RhD阴性血液；而作为献血者，他们的血液只能作为RhD阳性血使用。二是容易漏检，由于RhD抗原的变异，导致在常规的血型血清学检测时常规抗体无法与之反应，故易错判为RhD阴性，由于目前没有特别有效的清除不规则抗体的措施，所以这对于需多次输血的患者、妊娠期妇女来说危害十分巨大。因此准确的定型是确保正确输注的前提。目前血型的常规检测方法是血清学实验，但这个实验受多种限制，比如样本的质量、自身抗体或不规则抗体的干扰、疾病的影响等，同时对于DEL型这种只能通过吸收放散试验才能检测到的类别更是无法判断，这就需要利用分子生物学的方法在基因水平进行诊断。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于检测RhD阴性血型的SNP标记，可以准确的对红细胞RhD阴性血型进行确证，从而弥补现有技术的不足。

本发明提供一种与RhD阴性血型相关的SNP标记，包含有：

第一SNP标记，是RHD基因编码区域由起始密码子起第208位碱基发生了突变，由C突变为T；

第二SNP标记，是RHD基因编码区域由起始密码子起第211位碱基发生插入了G，导致后续移码突变。

本发明的另一个方面提供上述SNP标记的应用，是在制备检测红细胞RhD阴性血型的制品中的应用；

根据本发明的另一个方面，是提供上述SNP标记在检测红细胞RhD阴性血型中的应用。

上述的测定方法，是通过能扩增上述SNP标记的引物对待检测的血样DNA进行PCR扩增，扩增产物进行测序后进行基因型分析，确定待检样品是否存在上述的SNP标记。

上述方法中所使用的引物对，根据实施例的优选，其引物的序列信息如下：

RHD-2F:5’-TCCCCCTCGTCCTTCTCG-3’(SEQ ID NO:1)

RHD-2R:5’-CAGGATGCCCAGTTAATTTGAAT-3’(SEQ ID NO:2)。

其中SEQ ID NO：2同时为测序引物。