[发明专利]一种ASE‑HPLC法测定辛夷中木兰脂素含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于木兰脂素的提取领域，尤其是一种ASE-HPLC法测定辛夷中木兰脂素含量的方法。

背景技术

2015年版药典方法中所记载的关于提取辛夷中木兰脂素的方法为：取本品粗粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入乙酸乙酯20ml，称定重量，浸泡30分钟，超声处理(功率250W，频率33kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液3ml，加在中性氧化铝柱(100～200目，2g，内径为9mm，湿法装柱，用乙酸乙酯5ml预洗)上，用甲醇15ml洗脱，收集洗脱液，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

该方法所需时间较长，而且对技术人员的专业要求较高。

发明内容

针对上述不足，本发明旨在提供一种萃取时间短且重复性好的ASE法萃取辛夷中木兰脂素的方法，本发明还提供了一种HPLC法检测辛夷中木兰脂素含量的方法。

为了实现上述技术效果，本发明提供的技术方案是这样的：一种ASE-HPLC法测定辛夷中木兰脂素含量的方法，依次包括下述步骤：

步骤1：采用ASE法用甲醇萃取辛夷粉末，并收集甲醇萃取液；

步骤2：采用HPLC法测定甲醇萃取液中的木兰脂素的含量。

优选地，所述的步骤1具体包括下述子步骤：

步骤S1：将辛夷样品粉碎，取1g与1g硅藻土混合均匀；

步骤S2：将步骤1所得的混合物装于放有滤膜和3g中性氧化铝的ASE萃取池中，加硅藻土至与池口平行；

步骤S3：用甲醇萃取，结束后，用甲醇定容至50ml，摇匀、过滤，取滤液，即可。

优选地，步骤S3所述的萃取条件为：压力为1500psi，温度为100℃，时间为5min，次数为2次，冲洗体积为60％，吹扫时间为60s。

优选地，步骤S2所述的ASE萃取池体积为10ml。

优选地，步骤2所述的HPLC法的检测参数为：

a)仪器：agilent1260超高效液相色谱仪；

b)色谱柱：Agilent ZORBAX Extend-C18，1.8μm，4.6×100mm；

c)柱温：35℃；

d)流速：0.4mL/min；

e)流动相：体积比为35：1：64的乙腈-四氢呋喃-水；

f)检测波长278nm；

理论板数按木兰脂素峰计算应不低于9000。

本发明与传统方法相比，具有下述优点：

1、本发明提高了温度降低溶剂的黏度，减少了溶剂进入样品基体的阻止，增加了溶剂进入样品基体的扩散，降低溶剂和样品基体之间的表面张力，使溶剂溶解待测物的容量增加；

2、由于液体对溶质的溶解能力远大于气体对溶质的溶解能力，故萃取液体的沸点随压力升高而提高，从而使溶剂在高温高压下仍保持在液态；

3、本发明考察了使用乙酸乙酯、甲醇作为提取溶剂，结果乙酸乙酯与甲醇的提取效果基本一致，由于乙酸乙酯提取后不能直接作为上HPLC的溶剂需要蒸干，故采用甲醇更方便，故采用甲醇作为提取溶剂；

4、本发明考察了加入1g、2g、3g的中性氧化铝、不加入中性氧化铝进行考察，结果RAD为1.18％，证明加入中性氧化铝对其结果影响不大，但是又达到净化效果，所以试验过程中可以是用1g中性氧化铝进行除杂。

附图说明

图1为以木兰脂素对照品的浓度(mg)-峰面积进行线性回归图；

图2为木兰脂素对照品的色谱图；

图3为使用ASE法提取所得的木兰脂素的色谱图；

图4为使用药典方法提取所得的木兰脂素的色谱图；

图5为加入净化剂量的考察分析图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求书做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护的范围内所做的有限次修改，仍在本发明的权利要求保护范围内。

实施例1

1、仪器设备及试剂

1.1仪器：

电子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶剂萃取仪(美国DIONEX公司)、agilent1260超高效液相色谱仪。

1.2试剂：

水：符合GB/T 6682规定的一级水；

甲醇(CH₄O)：色谱纯(液相色谱用)。

2、方法

2.1对照品溶液的制备：