[发明专利]一种大麻抗原及制备方法

权利要求书

1.一种大麻抗原，其特征在于，其结构式为：

2.一种制备权利要求1的大麻抗原的方法，其特征在于，首先以大麻二酚为原料，与丁二酸酐反应，生成含羧基的半抗原；再由半抗原与牛γ-球蛋白(BGG)蛋白偶联，形成大麻全抗原。

3.一种制备权利要求1的大麻抗原的方法，其特征在于，包括如下步骤：

a)制备半抗原：将大麻二酚溶解于有机溶剂后，加入三乙胺反应，之后再加入丁二酸酐充分反应；有机溶剂萃取，洗涤有机相，干燥，过滤，浓缩；

b)偶联蛋白：将步骤a中的产物溶于有机溶剂，加入N-羟基琥珀酰亚胺和碳二亚胺，氮气保护下搅拌反应，完成后离心取上清；牛γ-球蛋白溶解于磷酸缓冲液中，与离心上清液充分混合后，2～8℃静置；

c)人工抗原纯化：将步骤b中的产物于磷酸缓冲液中透析，透析液离心取上清液即为大麻人工抗原。

4.一种制备权利要求3的大麻抗原的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)称取大麻二酚1eq，用N,N-二甲基甲酰胺溶解，加入三乙胺4～10eq在室温下搅拌反应10～60min，再加入丁二酸酐1.5～4eq，室温下搅拌反应6～24h；

(2)减压蒸去N,N-二甲基甲酰胺，加入水溶解，用乙酸乙酯萃取，合并有机相后，依次水洗，饱和氯化钠洗涤，有机相干燥，过滤，减压蒸干，得粗产物；

(3)将前一步反应产物，溶于N,N-二甲基甲酰胺，加入N-羟基琥珀酰亚胺1.5～3eq和碳二亚胺1.5～3eq，通氮气保护，室温下搅拌反应6～24h，反应结束后离心获得上清液；

(4)牛γ-球蛋白溶解于10mg/ml磷酸盐缓冲液，在快速搅拌下，将步骤(3)中的上清液和该牛-γ-球蛋白磷酸缓冲液混合均匀，将混合液于2～8℃静置

6～24h，得到人工抗原混合液；

(5)将人工抗原混合液转移入透析袋，用磷酸盐缓冲液透析，透析结束后离心取上清液即得到大麻人工抗原。

5.根据权利要求3所述的制备大麻抗原的方法，其特征在于，步骤b中，碳二亚胺为二环已基碳二亚胺DCC或N,N'-二异丙基碳二亚胺DIC或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐EDC中的一种或任意两种的混合液或三种的混合液。

6.根据权利要求4所述的制备大麻抗原的方法，其特征在于，步骤(2)中，还包括对粗产物进行提纯：TLC法提纯粗产物，展开剂为体积比为(7～12)：1的二氯甲烷与甲醇的混合液。

7.一种检测大麻吸食情况的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1中所述的抗原。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述检测大麻吸食情况，利用权利要求1中的抗原捕获抗体，该抗体为大麻在人体内代谢物，经过免疫应答产生的抗体，或者是大麻经过免疫应答产生的抗体。