[发明专利]扩增引物组、建库方法及SNP分型方法

说明书

本发明涉及分子生物学领域，提供了一种扩增引物组，用于制备扩增产物，所述扩增引物组包括第一引物和第二引物，所述第一引物从3’端至5’端依次包括扩增引物序列和锚定引物序列；所述扩增引物序列用于扩增含待测SNP位点的核酸片段；在扩增产物中，所述锚定引物序列用作测序引物，所述锚定引物序列及其锚定位置位于所述待测SNP位点的同一侧。本发明还提供了一种基于上述扩增引物组的建库方法和SNP分型方法。采用本发明的扩增引物组制备的文库分子，其上含有测序引物，在SNP分型过程中无需向体系中额外添加测序引物，避免了对多个样本进行测序时由于测序引物不同而产生的相互干扰，提高了测序效率和准确性。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，更具体地说，涉及一种扩增引物组、建库方法及SNP分型方法。

背景技术

单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphism，SNP）是指基因组上单个核苷酸位置上存在转换、颠换、插入、缺失等变化，其数量很多，多态性丰富。SNP被认为是遗传标志，人体许多表型差异、对药物或疾病的易感性等等都可能与SNP有关，因此SNP的分型对诸多疾病的治疗和用药有着积极的意义。

针对基因检测，二代高通量测序技术因其准确、灵敏的特性，应用范围不断扩大，已涉及生命科学研究以及医学研究的各个不同方面，利用二代高通量测序技术来进行SNP位点的检测也是目前的研究热点之一。但是，基于二代高通量测序技术的SNP分型方法，当同时对多个待测序样本进行检测时，需要向测序体系中加入多种测序引物，不同测序引物之间容易产生相互干扰，使得多位点测序准确性降低，从可能降低SNP分型检测的准确率。

因此，需要一种新的扩增引物组、建库方法及SNP分型方法，能够避免在同一体系中同时对多个待测SNP位点进行检测时，不同测序引物之间相互干扰的现象。

发明内容

本发明的目的在于提供一种扩增引物组、建库方法及SNP分型方法，旨在解决现有技术在同一体系中同时对多个SNP位点检测时，不同测序引物之间相互干扰的问题。

本发明的一个目的在于提出一种扩增引物组，用于制备扩增产物，所述扩增引物组包括第一引物和第二引物，所述第一引物从3’端至5’端依次包括扩增引物序列和锚定引物序列；所述扩增引物序列用于扩增含待测SNP位点的核酸片段；在扩增产物中，所述锚定引物序列用作测序引物，所述锚定引物序列及其锚定位置位于所述待测SNP位点的同一侧。

优选的，所述第二引物上含有切割位点；所述切割位点为尿嘧啶或限制性内切酶切割位点。

优选的，所述扩增引物序列长度为15至25bp；所述锚定引物序列长度为15至20bp。

优选的，所述扩增引物序列锚定的退火温度为57至63℃；所述锚定引物序列锚定的退火温度为42至50℃。

本发明的第二个目的在于提出一种建库方法，包括以下步骤：

A、利用扩增引物组对含待测SNP位点的核酸片段进行PCR扩增，得到扩增产物；所述扩增物组包括第一引物和第二引物，所述第一引物从3’端至5’端依次包括扩增引物序列和锚定引物序列；所述扩增引物序列用于扩增含待测SNP位点的核酸片段；在扩增产物中，所述锚定引物序列用作测序引物，所述锚定引物序列及其锚定位置位于所述待测SNP位点的同一侧；

B、在扩增产物含锚定引物序列所在端的相对端上连接接头，得到文库分子。

优选的，所述锚定引物序列的锚定位置与待测SNP位点之间的距离为1至5bp。

优选的，所述第一引物的5’端含有尿嘧啶，所述步骤B还包括以下步骤：

B0、采用特异性切割尿嘧啶的酶对扩增产物进行切割，得到第一切割产物。