[发明专利]乙醇在端粒体PCR反应中作为促进剂的用途

说明书

本发明涉及，公开了一种乙醇在端粒体PCR反应中作为促进剂的用途，将乙醇添加至端粒体PCR反应中，用于抑制二聚体的形成，提升PCR反应的特异性和扩增效率，起到促进作用，具有预料不到的技术效果。

技术领域

本发明涉及，尤其涉及一种乙醇在端粒体PCR反应中作为促进剂的用途。

背景技术

实时荧光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。能通过内参或者外参对样品中的特定DNA序列进行定量分析。由于PCR的反应机制相当复杂，在实际实验中某些干扰副作用是不可避免的。例如，引物和模板之间可能存在错配，引物自身配对形成二聚体等都会引起非特异性扩增，因此使扩增的特异性和效率降低。PCR反应扩增特异性的改进不仅仅通过对引物序列的优化设计，还可以通过对反应体系和程序的优化来实现。已证明通过向反应体系中加入添加剂如甲酰胺，甜菜碱，DMSO（二甲基亚砜），非特异性扩增问题可以在一定程度上得到改善。但上述添加剂的处理效果在许多体系中是不理想的。而在现有技术中，乙醇作为一种PCR反应抑制剂，能使蛋白质变性，从而影响DNA聚合酶的活性，通常要从反应体系中去除。人类基因端粒体区段的PCR反应，由于其序列的特殊性，引物极易形成二聚体，导致实时荧光定量PCR实验无法精确定量基因浓度。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种乙醇在端粒体PCR反应中作为促进剂的用途。本发明将乙醇添加至端粒体PCR反应中，发现乙醇能够有效抑制二聚体的形成，提升PCR反应的特异性和扩增效率，起到促进作用，具有预料不到的技术效果。

本发明的具体技术方案为：一种乙醇在端粒体PCR反应中作为促进剂的用途，将乙醇添加至端粒体PCR反应中，用于抑制二聚体的形成，提升PCR反应的特异性和扩增效率，起到促进作用。

本发明将乙醇添加至端粒体PCR反应中，发现乙醇能够有效抑制二聚体的形成，提升PCR反应的特异性和扩增效率，起到促进作用，具有预料不到的技术效果。

作为优选，所述乙醇的添加体积百分含量为2-8%。

作为优选，所述乙醇的添加体积百分含量为4-6%。

在上述添加量范围内，效果更佳。

与现有技术对比，本发明的有益效果是：本发明将乙醇添加至端粒体PCR反应中，发现乙醇能够有效抑制二聚体的形成，提升PCR反应的特异性和扩增效率，起到促进作用，具有预料不到的技术效果。

附图说明

图1为乙醇含量对CP值的影响图；

图2为标准品对DNA的CP值关于模板浓度对数值的线性关系图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的描述。

实施例

一、试剂：

1、乙醇，要求分析纯以上，购自上海泰坦科技股份有限公司；

2、HieffTM qPCR sybr Green Master Mix(No Rox Plus)溶液（以下简称MasterMix），

Master Mix指本PCR反应体系中的预混液buff，含有dNTP、Mg²⁺离子、EDTA等基因扩增要素以及SYBR Green荧光染料，购自上海翊圣生物科技有限公司；

3、引物，本实施例以人的DNA作为PCR模板，并使用两个引物扩增端粒体区段基因，这两个引物的序列分别如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示：