[发明专利]结直肠癌肝转移原发灶和转移灶配对模型

说明书

本发明涉及建立一种重演人疾病发病机制的结直肠癌肝转移原发灶和转移灶配对模型。包括如下步骤：(1)采集新发结肠癌肝转移原发灶与肝转移灶均经病理学诊断明确患者肿瘤组织；(2)造模前一天小鼠尾静脉注射IL‑2Rγ抗体(5mg/kg)预处理；(3)于4‑6周龄小鼠下腹部向两侧每侧移植3块2×2mm原发灶或转移灶肿瘤组织小块造模；(4)观察不同患者原发、转移灶模型瘤块成瘤率、生长速率和成瘤差异。

发明领域

本发明涉及结直肠癌(CRC)的一种临床相关模型及其建立方法。

发明背景

结直肠癌(CRC)是全世界第三位最常见的癌和第四位最常见的死因。CRC占所有癌发病率的超过9％。2010年，我国结直肠癌新病发生率在男性中占第5位(23.38％)，女性中占第3位(18.30％)，死亡率也分别占11.39％和8.64％，且随着年龄的增长而升高(中国2010年恶性肿瘤发病与死亡.中国肿瘤.2014)。同时，约有35％-55％患者在发现结直肠癌的同时已经有肝转移的存在(Current management of colorectal hepaticmetastasis.Expert Rev Gastroenterol Hepatol，2009)。

虽然已经开发了CRC的转基因模型(genetically engineered models，GEMs)，细胞系来源的移植模型和患者来源的瘤块或细胞移植模型(patient-derived xenografts，PDX)来研究CRC，GEMs常涉及相应目标化合物临床前评估的高度特异性靶分子。但是，疗效的评价会受到肿瘤生长延迟和GEMs仅能代表单一靶肿瘤模型这一客观事实的影响。由于小鼠与人类基因和各种生物学特性的差异较大，鼠源肿瘤动物模型在临床和药物开发的应用和价值受到限制。动物肿瘤移植模型是目前应用最多的模型，即用人源肿瘤组织或细胞移植到动物体内所形成的肿瘤动物模型。和细胞株产生的小鼠模型相比，PDX模型能更好地反映原发病人的病理特性以及基因表达(Efficacy of anti-cancer agents in cell linesversus human primary tumour tissue.Curr Opin Pharmacol，2010)，因此可以更准确地预测临床疗效。为研究发现新药的特异性靶点和准确预测疗效，肿瘤动物模型研究不可或缺，结肠癌肝转移原发灶与转移灶动物配对模型会是研究肿瘤转移机制的理想平台，是用于测试治疗剂和开发新型治疗策略的有价值的工具。

发明内容

本发明针对现有PDX模型的不足，提供了一种研究结直肠癌(CRC)转移机制的临床相关模型及其建立方法。

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供结直肠癌肝转移原发灶与转移灶动物配对模型的建立方法。

本发明的再一目的是，提供如上述方法所制备的小鼠结直肠癌肝转移原发灶与转移灶动物配对模型。

结肠癌肝转移捐献者来源的BABL/c裸鼠结肠癌原位灶移植模型与裸鼠配对肝转移移植模型的建立技术方案为：

1.标本采集，通过手术切除标本、穿刺活检标本收集捐献者原发灶、转移灶肿瘤组织。

2.动物模型(皮下)建立

(1)标本采集后，超净台剔除癌组织附带其他组织，标本分离取出后，应放入盛有适量人体组织培养液RPMI-1640的50ml无菌离心管中(培养液应完全没过标本)，并把离心管置于冰上以保持组织的活性。

(2)运送标本到动物中心，尽量缩短组织在体外的停留时间以保持组织的新鲜度，不要超过4小时。

(3)把标本放入100mm培养皿内(内有少量新鲜RPMI-1640)，分成两部分。用于动物移植的标本切碎至小于2×2×2mm的小块，转入冻存管，至于-80℃保存。另一部分放入10％NBF(neutral buffered formalin，4％formaldehyd)，并于24至48小时后转入70％酒精，常温保存。