[发明专利]一种脱细胞羊膜粉的制备方法

权利要求书

1.一种脱细胞羊膜粉的制备方法,其特征在于，包括以下步骤：

1)、将新鲜的羊膜清洗，去除表面血迹，剪成碎片；

2)、在4℃的振荡器中用去离子水洗涤12～24小时,每4～6小时更换一次去离子水；

3)、在4℃的振荡器中用质量分数为0.1～2％的Triton X-100和氢氧化铵混合液洗涤1～3天，每天更换洗涤液；或用器具轻刮羊膜表面后震荡细胞；

4)、在4℃的振荡器中用去离子水洗涤12～24小时,每4～6小时更换一次去离子水；然后用PBS洗涤12～24小时，每4～6小时更换PBS；

5)、-80℃保存24小时后冻干，将泥浆状支架置于一次性无菌平皿中，注意无菌操作，转移至冻干机冷阱中预冷，开启真空，按照预设的冻干工艺冻干，无菌收料；

6)、将冻干后的羊膜碎片放入钢桶中浸入液氮中预冷后，钢桶放入冷冻研磨机中研磨成粉；

7)、将羊膜粉辐照灭菌后-80℃储存备用；

步骤2)-4)中温度保持在4℃，振荡器的转数为120～150rpm；将步骤5)所得的无菌脱细胞冻干羊膜碎片放入液氮中预冷2min后在冷冻研磨机中，研磨频率为40～80Hz，研磨时间为20～60s，形成粒径250μ m的羊膜粉。

2.如权利要求1所述的脱细胞羊膜粉的制备方法，其特征在于，所述步骤7)中采用15～30KGy的γ射线或电子束辐照灭菌。

3.如权利要求1所述的脱细胞羊膜粉的制备方法,其特征在于，步骤5)中将冷冻后的羊膜碎片放入冻干机冷阱中预冷2-5小时，开启真空冻干24～48小时。

4.如权利要求1所述的脱细胞羊膜粉的制备方法,其特征在于，步骤5)-7)中严格控制不高于4℃的低温环境，冻干、研磨工艺过程中控制低温环境以保护羊膜中的活性因子。

5.如权利要求1所述的脱细胞羊膜粉的制备方法,其特征在于，以步骤7)中的脱细胞羊膜粉末为中间产品，消化后制成可溶羊膜、进一步交联后制成羊膜胶、喷雾、药膏添加到辅料、药物中应用。

6.如权利要求1所述的脱细胞羊膜粉的制备方法,其特征在于，以步骤7)中的脱细胞羊膜粉末与生物大分子聚合物及合成聚合物交联应用于组织工程领域。